活細胞工作站

活細胞工作站

活細胞工作站 Live cell Imaging System 主要是指在活細胞在體外模擬體內環境的條件下,進行顯微成像採集定時拍攝,在白光或螢光下觀測活細胞的增殖細胞遷移粘附等等進行細胞分析成像。

活細胞工作站LCI活細胞工作站活細胞螢光成像工作站活細胞顯微成像採集系統LiveCellImagingSystem活細胞圖像拍攝活細胞觀測活細胞增殖活細胞遷移等等活細胞的分析監測系統,現在市場上使用的活細胞工作站由高級自動倒置顯微鏡、活細胞長時間孵育系統、Z軸微光切系統(數碼共聚焦系統)、單色儀、高靈敏冷CCD、圖像軟體工作站組成。還需要加熱控制器;溫度控制器;CO2控制器;CO2培養箱。用於培養狀態下細胞動態的研究。儀器可以自動聚焦、單細胞追蹤、多位點成像。成像速度高、圖像清晰度高
活細胞工作站可實現在細胞水平上的定性和定量分析、活細胞圖像處理、活細胞動態示蹤。在分子水平,可做到基因定位定量表達的動態分析、蛋白質合成降解運輸和相互作用的動態研究、細胞骨架的代謝動力學測定和細胞周期各時相的動態觀察等。活細胞動態觀察、長時間采圖、電影;極快速螢光事件記錄;細胞骨架(細胞3D結構重建、及空間定位)、蛋白質合成和胞內信號傳導等研究;螢光共振能量轉移FRET;螢光共定位;螢光追蹤;螢光圖像處理、測量。

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活細胞成像面臨的一個主要挑戰是如何在實驗過程中保持細胞的活性,並使細胞的機能儘可能接近於自然狀態。
此外,某些細胞類型(例如培養的細胞)在實驗過程中需要進行保溫處理和二氧化碳濃度的條件。高級的保溫室可儘量降低顯微鏡載物台上所培養細胞的分裂活動。而傳統的活細胞工作站由於無法在培養箱的環境條件下進行顯微圖像的採集,必需使用在與顯微鏡相配套的控溫系統以保證細胞培養生長的溫度,而且還要使用二氧化碳和氧氣的相關附屬檔案,在活細胞顯微成像上增加了使用難度和購買成本,因此如何簡單方便的使活細胞顯微成像的實現,一直是眾多儀器廠商在不斷的發展目標,而Micforce米力光國際co.ltd提供廉價高效方便的活細胞成像工作站得到了眾多用戶的認可。
• JuLI高級細胞成像儀活細胞螢光成像儀活細胞觀測儀
• 可放在培養箱或生物安全櫃中使用,進行活細胞實時觀察和時間序列(Timelapse)實驗
• Wi-Fi傳輸:可在iPhone、iPad、PC等終端上進行實時監控,而無需從培養箱中取出
• 一體化設計,觸屏操控,外觀時尚,操作簡便
• 超長壽命:配置40,000小時的藍色LED光源(可選紅色)
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• 使用環境無限制:可在任意室內光線(光照或暗室)條件下觀察
• 三種觀察模式,滿足不同要求:白光、螢光及疊加模式,圖像清晰
• 自帶圖像分析軟體:擴展JuLI的套用功能,可進行細胞增殖、遷移、計數、及細胞表面標記物分析等
• 儀器用途:
• •活細胞成像;(定時拍攝功能)
• •細胞遷移測定;
• •最佳化細胞分析;
• •細胞培養質量控制;
• •細胞增殖分析

• 儀器參數:
micforcemicforce

電源:AC100-240V,50-60Hz
CPU:AMDAU1250
放大率:10x和20x
濾光器:激發光、散射光、二向色濾光片
光源:白光/藍光LED(488nm)
可選:白光/紅光(630nm)
相機:CMOS1.3M像素(1280X1024)
顯示器:7’TFT-LCD(WVGA,800×480)
重量:<5Kg
尺寸:220×375×220mm
micforce控制系統micforce

目的通過將骨髓間充質幹細胞(BMSCs)培養在靜電紡絲素/聚乳酸納米纖維上,研究BMSCs的生長及成神經分化情況.方法用家蠶絲素、柞蠶絲素分別與聚乳酸共混製成靜電紡絲素/聚乳酸納米纖維,將第5代大鼠BMSCs培養其上,於24h後通過活細胞工作站觀察細胞的黏附情況,並進行表型鑑定及存活檢測.接種後待細胞長至60%左右,用bFGF/BHA誘導細胞成神經分化,並設多聚賴氨酸組進行對照.在誘導5h和維持48h時,觀察細胞的形態學改變,通過免疫螢光法鑑定神經細胞特異性標誌物Nestin,β-Ⅲ-Tubulin和NCAM的表達並進行定量統計分析.結果BMSCs在靜電紡絲素/聚乳酸納米纖維上的黏附情況良好,細胞生長於納米纖維上.存活檢測中幾乎未發現死細胞,多數細胞在材料上可存活.神經分化的形態學改變與多聚賴氨酸組一致,並且培養在納米纖維上的細胞分化時出現的突起可纏繞在紡絲纖維上.神經特異標誌的表達情況與多聚賴氨酸對照組的差異無統計學意義(P>0.05).結論靜電紡絲素,聚乳酸納米纖維具有良好的生物相容性,可支持BMSCs的黏附及成神經分化,且對細胞生存無毒性.
目的將活細胞工作站(LCS)套用於實時觀察小鼠卵母細胞後期成熟和極體排放過程。方法運用LCS技術平台,利用hoechst33342標記DNA,同時結合明場觀察,實時記錄小鼠卵母細胞後期成熟和第二極體排放過程。結果在建立最適工作條件後,成功將LCS技術平台套用於小鼠卵母細胞觀察,獲得了第二極體排放的實時影像。結論LCS技術可成功地套用於小鼠卵母細胞觀察,為進一步擴展LCS套用範圍,獲得卵母細胞及早期胚胎生長發育過程的實時影像打下良好的基礎
目的探討不同直徑絲素蛋白納米纖維(silkfibroinnanofibers,SFS)對嗅鞘細胞(olfactoryensheathingcells,OECs)生長及遷移的影響,為脊髓損傷(spinalcordinjury,SCI)修復材料的選擇提供實驗基礎和理論依據。方法(1)SFS的製備:運用靜電紡絲技術製備SFS,並通過掃描電鏡(scanningelectronmicroscope,SEM)觀察。(2)OECs的純化培養:取SD大鼠嗅球新鮮分離的OECs,採用改良差速貼壁法純化培養。(3)OECs與SFS的複合培養:將純化後的OECs分別接種至以左旋多聚賴氨酸(poly-l-lysine,PLL)(對照組)和SFS(400nm,1200nm)(實驗組)包被蓋玻片的培養皿中進行複合培養。(4)檢測指標:複合培養不同時間點行倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察細胞形態、生長、分布及與材料黏附情況。神經生長因子受體p75(nervegrowthfactorreceptorp75,NGFRp75)及膠質原纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)免疫螢光染色測定細胞表現型,噻唑蘭(ThiazoylBlueTetrazoliumBromide,MTT)法測定支架材料上OECs的增殖情況,死活細胞染色試劑及流式細胞術檢測細胞生存率,細胞的遷移通過LeicaAF6000活細胞工作站拍攝得到圖像,活細胞工作站動態跟蹤觀察OECs生長遷移並計算細胞遷移軌跡、遷移行為、遷移效率、遷移速率。結果(1)倒置相差顯微鏡示SFS上培養的OECs與對照組相比,細胞沿絲素纖維遷移,細胞突起方向走向較一致,形態特徵無顯著差異。(2)掃描電鏡觀察顯示SFS平均直徑約為(395±3)nm、(1210±7)nm,纖維呈三維立體網狀結構,分布均勻,OECs與材料結合緊密,且細胞突起方向與纖維走向較一致,形態與對照組無顯著性差異。(2)免疫螢光染色:培養4d時,免疫螢光染色顯示實驗組NGFRp75/GFAP陽性,OECs在SFS材料上仍保留其特有的表現型。(3)MTT檢測顯示:培養第4d時,對照組OECs的吸光度值較1200nm直徑的材料OECs的吸光度值有顯著差異(p0.05),培養第7d時,對照組OECs的吸光度值較實驗組吸光度值有顯著差異(p0.05),而且OECs在400nmSFS材料上的吸光度值比在1200nmSFS材料上的吸光度值高,有統計學意義(p0.05)。400nmSFS相比1200nmSFS更能促進OECs的增殖。(4)死活細胞染色試劑檢測顯示:在培養第4、7天時,實驗組細胞形態較對照組正常,成活率較高,兩組死亡細胞數比較無顯著性差異。(5)流式細胞術檢測結果顯示:在培養第4天時,實驗組OECs較對照組OECs的凋亡率無顯著差異(p0.05)。(6)活細胞工作站觀察顯示:細胞的遷移速率,遷移效率和對照組相比均無顯著地統計學差異(p0.05),兩種直徑的SFS對OECs在纖維上的遷移速率、遷移效率沒有顯著影響。結論不同直徑絲素蛋白納米纖維對嗅鞘細胞的生長與遷移均具有支持和引導作用,SFS有望成為一種新型的組織工程支架材料結合OECs移植修復脊髓損傷。
目的確定順式高爾基體蛋白(GM130)對小鼠卵母細胞紡錘體遷移及減數不對稱分裂的影響.方法免疫螢光法檢測GM130在小鼠卵母細胞的定位,活細胞工作站延時拍攝系統捕捉紡錘體在降調GM130表達後的的動態變化.結果降調GM130的表達後,第一極體排出率下降,在排出的極體中,大極體的比率升高;但對微絲網路及微絲帽的影響不明顯.向卵母細胞內注射β5-tubulin-GFPmRNA和GM130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)的混合物後,用活細胞工作站延時拍攝系統證實了降調GM130會影響卵母細胞紡錘體的遷移,紡錘體單極拉長,並能與該側的皮質接觸,產生胞質分裂環,導致大極體排出.若拉長的紡錘體尚不能與皮質接觸,則細胞阻滯在分裂中期Ⅰ(MI期),沒有極體排出.另外,降調GM130的表達也會影響磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1/2(p-MEK1/2)在紡錘體極的定位,用絲裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)的抑制劑U0126處理MI期的卵母細胞則發現GM130不再在紡錘體兩極聚集,而是散在分布於胞漿.結論GM130可能參與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路在小鼠卵母細胞紡錘體遷移及不對稱分裂中起重要作用.

Ⅱ型糖尿病作為一種病理機制複雜的代謝紊亂疾病,和肥胖、高血壓、高血脂、動脈粥樣硬化等疾病共同發生髮展、緊密聯繫,合稱為代謝綜合徵,其中糖尿病血管併發症嚴重危害著人類的健康。作為糖尿病的共同特徵,高血糖是參與導致糖尿病血管功能病變的不同發病機制及發病環節中一個獨立的重要致病因素。血管平滑肌細胞的功能損傷在糖尿病血管併發症的發生髮展中起著至關重要的作用,而其損傷又是多種影響因素作用於不同發病環節、影響多種分子機制的結果。本研究提出建立高糖刺激的平滑肌細胞損傷模型,並可用於抗糖尿病血管併發症藥物的篩選。研究的目的是利用培養的大鼠主動脈血管平滑肌細胞,考察高糖對細胞功能的損傷,利用基於細胞的阻抗分析系統監測平滑肌細胞的增殖、通過活細胞工作站實時觀察平滑肌細胞的遷移情況,並在模型建立的基礎上進行具有平滑肌細胞保護作用的藥物評價。將基於細胞的阻抗分析套用於平滑肌細胞增殖功能的研究,可實時監測細胞從貼附、伸展、增殖到融合的過程,以及刺激因素誘導的平滑肌細胞增殖變化的過程,並利用傳統的WST-1細胞活性檢測手段驗證了這一變化。利用活細胞工作系統,可對孵育在培養箱中的平滑肌細胞進行長時程的動態觀測。研究結果表明,高糖(22.5mmol/L)誘導了平滑肌細胞的異常增殖遷移,而黃芪甲苷能顯著的改善高糖引起的平滑肌細胞功能損傷,抑制在高糖誘導下的平滑肌細胞的增殖活力和遷移水平。在該研究結果的基礎上得出以下結論:RT-CES系統基於細胞阻抗的實時監測方法能動態地評價血管平滑肌細胞的功能損傷,並能有效地評價中藥單體對平滑肌細胞的保護作用;活細胞工作站可對平滑肌細胞在生理病理條件下的活動進行實時動態監測,同時也可用於藥效評價;黃芪甲苷對平滑肌細胞有一定的保護作用,可預防和緩解糖尿病血管併發症,具有一定的開發前景。該實驗方法的建立,為今後深入研究血管平滑肌細胞功能,在心血管疾病發生過程中的作用及中藥有效成分的篩選評價打下一定的基礎。

目的惡性膠質瘤是目前最為盛行的原發腦瘤,幹細胞移植極有希望治療膠質瘤。因骨髓間充質幹細胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)體內體外均顯示很強的膠質瘤趨化性,所以套用BMSCs治療膠質瘤即是很好的細胞治療手段。然而,關於細胞因子參與BMSCs遷移的報導卻很少,本研究旨在探討成神經分化的BMSCs向C6細胞條件培養基和SDF-1α(stromalcell-derivedfactor1α)的遷移行為。方法本實驗分三個階段研究成神經分化的BMSCs向C6細胞條件培養基和SDF-1α的遷移。(1)採用Percoll分離法在體外培養並擴增BMSCs,通過免疫螢光染色的方法檢測表面抗原對BMSCs進行鑑定。(2)採用抗氧化劑誘導方案誘導BMSCs向神經樣細胞分化,即先用濃度為10ng/ml的bFGF預誘導24h,加入濃度為200μM的丁羥基茴香醚(BHA)和2%的二甲基亞碸(DMSO)誘導5h,再用含有N2的H-DMEM維持48h。觀察誘導分化過程中BMSCs的形態變化,通過免疫螢光染色檢測誘導的細胞表達神經細胞特異性標誌物Nestin、β-III-tubulin和NSE的情況。(3)運用Dunnchamber研究了分化細胞在具有濃度梯度的趨化因子中的定向遷移行為。分化不同狀態BMSCs的遷移通過德國LeicaAF6000活細胞工作站拍攝得到圖像,套用NIHImageJ分析圖像,每個分化點隨機抽取40個細胞進行統計得到細胞的遷移速率、遷移效率和誘導5h的遷移軌跡。接著,我們運用Boydenchamber研究了BMSCs在成神經分化過程中的趨化性遷移(Chemotaxis)和隨機遷移(Chemokinesis)。以正常培養的BMSCs作為對照,隨機抽取對照組和實驗組各10個視野,細胞計數,計算遷移係數,遷移係數=實驗組/對照組。結果(1)採用Percoll淋巴細胞分離液及不連續密度梯度法,成功分離培養出大鼠骨髓間充質幹細胞,可穩定傳至20代以上。表型鑑定結果為CD29、CD71、CD90、CD106呈陽性,CD34、CD45呈陰性。(2)用bFGF/BHA誘導BMSCs向神經樣細胞分化,預誘導24h,細胞變成長梭形;誘導5h,細胞即發生劇烈的形態改變,出現胞體回縮、突觸伸展等神經細胞的形態特徵;維持48h,細胞出現更多的分叉,並出現二級叉。對照組細胞無明顯的形態變化,免疫螢光染色顯示誘導的細胞表達神經前體細胞標誌物Nestin、β-III-tubulin和成熟神經元標誌物NSE。對照組不表達NSE,誘導組與對照組比較有統計學差異(P0.05)。(3)Dunnchamber分析顯示,C6細胞條件培養基組和SDF-1α組誘導細胞的遷移速率和遷移效率明顯高於對照組,表明C6細胞條件培養基和SDF-1α對BMSCs具有趨化作用,單個細胞遷移軌跡實驗也證實了這一結果。此外,分化不同狀態的BMSCs向C6細胞條件培養基和SDF-1α的趨化程度也不同。當Boyden上室為L-DMEM懸浮的細胞,下室為C6細胞條件培養基時,分化細胞的遷移數目明顯多於對照;而當上下室均為C6細胞條件培養基時,分化細胞的隨機遷移與對照無顯著差異。結論BMSCs的定向遷移與分化狀態密切相關,預誘導24h分化細胞的定向遷移最強

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