醋酸纖維
膜電泳實驗方法
（一）材料與試劑
1．pH8.6離子強度0.05巴比妥緩衝液
2．0.5％氨基黑染色液
3．透明液：
冰醋酸3份
95％乙醇2份
混合即可
4．醋酸纖維膜
（二）操作方法
1．將醋酸纖維膜條浸於巴比妥緩衝液中，浸透後用竹鑷子夾到濾紙上，吸去過多的水分。將膜的光滑面向下搭在電泳槽兩側的濾紙橋上，注意搭平。
2．加樣用微量加樣器於負極端1.5cm處加樣1µl～3µl，注意樣品要成一條直線且垂直方向。也可用血球計數板蓋玻片蘸取樣品輕輕點上。
3．電泳電壓10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm電泳45min～60min，至電泳區帶展開約2.5cm～3.5cm時，關閉電源。
4．染色將膜浸於氨基黑染色液中，染色數分鐘。
5．透明將染色的醋酸纖維膜浸於透明液中，漂洗5min~10min，至背景呈乳白色為止。為了防止膜上出現許多氣泡，可以逐漸升高透明液濃度10％、20％以至30％。
6．結果觀察及保存透明後，將膜貼於玻璃上，乾後取下，即可觀察結果並保存。
7．定量將各區帶剪下，分別浸於4Mol/LNaOH4ml中，振搖數次，約2h，色澤被浸出，於580nm～620nm比色，測出各區帶的OD值。同時剪一塊大小相似無蛋白的透明膜同樣處理，做為對照。
計算各區帶蛋白含量百分比（以血清為例）
總OD值T＝Aα1α2βγ
白蛋白％=A/T×100％
以此類推。
（三）注意事項
1．醋酸纖維膜孔隙小，含水量少，且較薄，因此它對熱很敏感，故應注意控制電壓、電流。
2．樣品不可過多，只需幾微升即可。
3．加樣一定要呈直線、垂直、分布均勻，這樣泳動的區帶整齊、不歪。
4．注意醋酸纖維膜的質量，浸泡很久仍有大塊白色硬點者可棄之不用。
