膜內側翻外

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細胞早期凋亡

膜內側翻外

用He-Ne雷射照射引起離體小鼠胸腺細胞凋亡,利用流式細胞計定量檢測AnnexinV-FITC或Rh123和PI雙標記早期凋亡的胸腺細胞,利用透射電子顯微鏡對凋亡細胞作形態觀察。發現雷射照射60min(光劑量為47.694～51.822J/cm2),細胞早期凋亡明顯增加,隨著照射時間延長,光劑量增加,細胞早期凋亡百分率也隨之增加,表明胸腺細胞經雷射照射後,早期凋亡細胞膜上磷脂醯絲氨酸由質膜內側外翻至質膜的外表面；同時線粒體功能損失,其跨膜電勢下降。

檢測試劑盒

磷酯醯絲氨酸(phosphatidylserine,PS)是細胞膜的一種組成成分，在正常細胞主要分布在細胞膜內側；細胞發生凋亡的早期，PS會外翻到細胞表面，即細胞膜外側。AnnexinV對PS有高度的親和力，可以選擇性結合和標記PS。本試劑盒採用重組人AnnexinV-EGFP融合蛋白，來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的PS，標識出凋亡細胞。由於壞死細胞和凋亡晚期細胞，其膜內側的PS也可以被AnnexinV結合，通常用另一種活細胞非透過性螢光染料碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)進行雙重染色，以區別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡晚期的細胞。用AnnexinV-EGFP和PI染色後，正常的活細胞不被AnnexinV-EGFP和PI著色；凋亡早期的細胞僅被AnnexinV-EGFP著色，PI染色呈陰性；壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被AnnexinV-EGFP和PI著色。用流式細胞儀或螢光顯微鏡直接觀察PS外翻這一細胞凋亡的重要特徵，是一種快速簡便的細胞凋亡經典檢測方法。

相關詞條

胸腺細胞、細胞、磷脂醯絲氨酸、蛋白、顯微鏡