真菌菌體

真菌菌體

真菌菌體，是一種從感病昆蟲血淋巴中分離純化昆蟲病原真菌菌體的方法。它是採用一系列酶處理感病昆蟲的血細胞，以破壞和除去昆蟲的遺傳物質，並加以分離純化製得。將獲得的病原真菌菌體用來提取DNA和mRNA，經PCR和RT-PCR的驗證，無昆蟲遺傳物質的污染，可用於構建基因文庫，也為進一步揭開蟲生真菌侵染機制打下堅實基礎。

特徵

真菌菌體

一種從感病昆蟲血淋巴中分離純化昆蟲病原真菌菌體的方法，其特徵在於：將感病昆蟲的血細胞採用酶處理進行裂解及其DNA和RNA採用酶處理進行降解，再加以分離沉澱，純化製得病原真菌菌體；在整個酶解過程中，採用聚合酶鏈式反應(以下稱PCR)檢測保守序列監控，最後採用PCR和逆轉錄-聚合酶鏈式反應(以下稱RT-PCR)檢測保守序列方法對昆蟲病原真菌菌體進行鑑定。

實驗方法

真菌菌體

採用正交實驗方法，對東亞飛蝗(Locusta migratoria)血細胞裂解及其DNA和RNA降解的條件進行了最佳化。在最佳化條件下，不僅去除了感病東亞飛蝗血淋巴中的血細胞及DNA和RNA，而且成功地分離和純化了綠僵菌(Metarhizium anisopliae)菌體。裂解血細胞及其DNA和RNA的最佳酶解條件為：蛋白酶K的濃度為1 mg/mL，作用溫度為26℃，時間為60 min脫氧核糖核酸酶(DNAase Ⅰ)的用量為5U，核糖核酸酶(RNAase A)的濃度為0.5 mg/mL，作用時間為35 min，作用溫度為30℃。以蝗蟲特異引物進行PCR及RT-PCR檢測結果表明，從綠僵菌侵染後的蝗蟲血淋巴中分離純化無蝗蟲DNA和RNA污染的綠僵菌菌體，為後續分離和克隆綠僵菌侵入蝗蟲體內後表達的基因，研究它們在致病機理中的作用奠定了基礎。

方法研究

從寄主昆蟲血淋巴中獲取病原真菌菌體的方法研究

真菌菌體

金龜子綠僵菌(Metarhizium anisopliae)是一類套用廣泛的昆蟲病原真菌，在昆蟲防治中起著重要作用。與化學農藥相比，儘管真菌殺蟲劑安全，無環境污染，但卻存在著殺蟲速率緩慢的弱點，這在很大程度上阻礙了真菌殺蟲劑的套用。昆蟲病原真菌致病機制的研究可為發展新型高效真菌殺蟲劑提供依據。真菌突破昆蟲表皮障礙侵入寄主血淋巴後，病原真菌侵入昆蟲體後主要在血腔內生長增殖，以蟲菌體等形式存在於寄主體內血淋巴中，直到寄主死亡。多數昆蟲病原真菌能夠迅速穿透昆蟲體壁,通常在24 小時左右就能夠侵入寄主體內，但是，需要一周甚至更長的時間才能使昆蟲致死。因此，研究病原真菌在侵入昆蟲體內後使寄主致死的機制具有重要意義。弄清病原真菌在侵入昆蟲體內後的基因表達情況是致病機制研究的重要內容。從感病昆蟲體內直接獲取病原真菌菌體，以分離和克隆綠僵菌侵入蝗蟲體內後表達的基因，對於研究它們在致病機理中的作用具有非常重要的意義。 本文採用正交實驗方法，對東亞飛蝗(Locusta migratoria)血細胞裂解及其DNA 和RNA 降解的條件進行了最佳化。在最佳化條件下，不僅去除了感病東亞飛蝗血淋巴中的血細胞及DNA 和RNA，而且成功地找出真菌菌體。

真菌慨述

真菌菌體

真菌（fungus；eumycetes）是具有真核和細胞壁的異養生物。種屬很多，已報導的屬達1萬以上，種超過10萬個。其營養體除少數低等類型為單細胞外，大多是由纖細管狀菌絲構成的菌絲體。低等真菌的菌絲無隔膜，高等真菌的菌絲都有隔膜，前者稱為無隔菌絲，後者稱有隔菌絲。在多數真菌的細胞壁中最具特徵性的是含有甲殼質，其次是纖維素。常見的真菌細胞器有：線粒體，微體，核糖體，液泡，溶酶體，泡囊，內質網，微管，鞭毛等；常見的內含物有肝糖，晶體，脂體等。 真菌通常又分為三類，即酵母菌、黴菌和蕈菌（大型真菌），它們歸屬於不同的亞門。 大型真菌是指能形成肉質或膠質的子實體或菌核，大多數屬於擔子菌亞門，少數屬於子囊菌亞門。常見的大型真菌有香菇、草菇、金針菇、雙孢蘑菇、平菇、木耳、銀耳、竹蓀、羊肚菌等。它們既是一類重要的菌類蔬菜，又是食品和製藥工業的重要資源。