核蛋白抗原
一種禽流感病毒基質蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表達製備方法，屬於生物技術領域，特別是涉及一種AIV融合抗原蛋白及製備。本發明提供一種由兩種AIV抗原蛋白組成的融合抗原蛋白，能有效檢測致病率很高的A型禽流感病毒基質蛋白及核蛋白的抗體的禽流感病毒基質蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表達製備。本發明首先構建質粒pPIC9K-M-Np，然後M-Np蛋白畢赤酵母真核表達及製備。本發明開展了利用畢赤酵母真核表達系統表達製備的M-Np融合抗原蛋白的研究。其表達量高、特異性強、易於純化、具有完整的空間構象等特點完全符合ELISA快速檢測試劑盒的鑑定要求。
簡介
禽流感防制研究的熱點之一。該研究用國內分離的禽流感低致病力流行毒株H14N5為材料，採用RT-PCR、基因克隆、轉染等分子生物學和細胞培養等實驗室技術，成功在桿狀病毒系統高效表達禽流感病毒重組核蛋白，經過一系列實驗證明表達產物具備良好的生物學活性，完全可以替代舊產品，用作禽流感的瓊擴診斷。套用重組抗原對多份SPF雞血清和新城疫、傳染性法氏囊病等15種主要其他疫病陽性血清樣品進行檢測，結果均為陰性；檢測陽性的血清樣品能中和禽流感病毒。重組抗原與舊抗原相比較：重組核蛋白抗原的沉澱線細密、清晰；而且徹底解決了常規清擴抗原潛在的生物安全性問題，同時大大簡化了生產工藝和降低了生產成本。實驗室及現地套用證明，禽流感病毒重組瓊擴抗原活性好、實用性強，生產成本低，敏感、特異，易於保存及操作，是禽流感防制中簡單有效診斷。
相關資料
採用RT-PCR擴增我國H5N1禽流感病毒NP基因，亞克隆於含有組氨酸標籤的原核表達載體中，在大腸桿菌中高效表達。所表達的蛋白經Ni(上標+)親和色譜法純化，SDS-PAGE電泳分析其純度達95%以上，Western-Blotting鑑定具有良好的免疫反應活性。利用純化蛋白作為診斷用抗原，建立了禽流感的瓊脂擴散診斷方法。所建立的診斷方法在對禽流感強陽性和弱陽性血清的檢測中，均出現了緻密而清晰的沉澱線，且沉澱線的亮度與所加入的重組抗原的量成正比；而對雞新城疫、雞傳染性法式囊等8種禽疫病陽性血清和SPF雞血清的檢測中，無沉澱線出現且沒有交叉反應；利用該方法對30份進出口送檢樣品進行檢測，其結果與國內同類試劑盒相符性達100%。實驗室和現地使用證明，利用純化的重組NP抗原所建立的方法簡便、可靠、易於標準化，可為我國禽流感的獸醫診斷、流行病學普查和出入境檢驗檢疫提供有力的保障。
