蛋白電泳

蛋白電泳是利用血清蛋白質為膠體的性質,使其在一定條件下帶有電荷並在電場中泳動。

蛋白電泳的原理

在鹼性環境裡,血清蛋白皆帶陰電荷,在電場中向陽極泳動,因各蛋白質等電點和分子量有差異,分子量小、陰電荷多泳動最快;分子量大、陰電荷較少者泳動較慢。電泳後,從陽極開始,依次為白蛋白、a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五個區帶。

常用蛋白電泳檢測技術與檢測項目

血清蛋白電泳
新鮮血清經電泳後可精確地描繪出患者蛋白質的全貌,有助於許多臨床疾病判斷的參考,在各類教材書上已清晰的描述了各種病理現象所顯現的圖像,一般常見的是白蛋白降低,某個球蛋白區域升高,提示不同的臨床意義。如球蛋白多克隆(poly-clonal)增高,β-γ融合的橋連現象,在γ區呈現細而密的寡克隆(oligoclonal)區帶,及由單一克隆漿細胞異常增殖所產生的單克隆(monoclonal)免疫球蛋白區帶,又稱M蛋白(Monoclonal Protein)帶,血清蛋白電泳是其首選的實驗診斷方法。
血清蛋白電泳目前最常用的檢查方法是醋酸纖維膜電泳法。
免疫固定電泳
血清免疫固定電泳(Immunofixation, IF)技術是血清蛋白質在瓊脂糖凝膠介質上經電泳分離後,套用蛋白質固定劑和各型免疫球蛋白及其輕鏈抗血清,加於凝膠表面的泳道上,經孵育和擴散後,若有對應的抗原存在,則在適應位置形成抗原抗體複合物並沉澱下來。染色後蛋白質電泳參考泳道和抗原抗體沉澱區帶被氨基黑著色,根據電泳移動距離分離出單克隆組份,可對各類免疫球蛋白及其輕鏈進行分型。血清免疫固定電泳技術用於M蛋白的型、亞型和輕鏈型,本周(Bence-Jonse)蛋白和游離輕鏈的分型和鑑別。
同工酶電泳
血清乳酸脫氫酶同工酶電泳
血清肌酸激酶及其亞型同工酶電泳
血清鹼性磷酸酶同工酶電泳
血清鹼性磷酸酶同工酶電泳具有三種不同結構的基因編碼或在轉移後修飾的結果,按其胺基酸序列可分為小腸型、胎盤型和組織非特異型(肝、腎、骨),它們各自表達產物可在血清中呈現,具有不同的意義。利用麥胚凝集素(wheat germ agglutinin, WGA)與ALP-L1和ALP-B糖鏈親和力的不同,血清與WGA作用再經電泳後可將ALP同工酶予以分離。肝外膽道阻塞轉移肝癌時,高分子ALP(ALP-L2)明顯增高,在原發性肝癌時肝型ALP(ALP-L1)明顯增高,骨轉移性癌時ALP-B增高。
脂蛋白電泳
套用自動電泳系統可將血清中脂蛋白組份進行分離,呈現LDL、VLDL和HDL條帶,輸入TC值,計算各種脂蛋白中膽固醇含量,LDL-C/HDL-C比值在正常人群組與冠心病患者組存在顯著差異(p<0.001);診斷臨界值(cut-off point)為3.89,診斷靈敏度76.7%,特異性79.8%。LDL-C/HDL-C比值是粥樣硬化性冠脈疾病重要的危險因子之一,明顯優於膽固醇或其它血脂的單個含量指標,且隨比值的增加,患冠脈疾病的危險性相應增大。
在凝膠中脂蛋白的等電點不同,不僅可區分α,前β和β區帶,又因介質中含有抗LP(a)抗體及陽離子存在,抗LP(a)抗體與患者血清中LP(a)結合形成複合物,陽離子則抑制其它脂蛋白的泳動速度,LP(a)便與其它脂蛋白分離開來。清晰的LP(a)條帶呈現在前β與γ區域之間,陽性條帶掃描後,可獲得區帶的面積及其百分含量,提高了對心、腦血管獨立的危險因子LP(a)檢測的敏感性和特異性。
血紅蛋白電泳
血紅蛋白電泳可使正常血紅蛋白HbA與HbA2分離,也可檢測出大部分異常血紅蛋白如:HbS、HbD、HbC和HbE。當HbA2、HbC和HbE>20%時,則難以分離和鑑別。應先用鹼性瓊脂糖凝膠血紅蛋白電泳進行正常和異常血紅蛋白的分離和檢測,通常用於孕婦的篩選,然後再進行酸性瓊脂糖凝膠血紅蛋白電泳,對異常血紅蛋白予以分離和鑑別。
血紅蛋白遺傳性分子病常分為異常Hb病和地中海貧血兩大類。異常Hb病如鐮狀細胞貧血,在鹼性緩衝液中異常HbS電泳區帶的位置呈現在HbA與HbA2之間,異常血紅蛋白的HbC和HbE電泳遷移率都十分緩慢,HbC和HbA2可重疊。在PH6.2的枸櫞酸緩衝液的是瓊脂糖介質電泳中,由於HbC不能與HbA分離,這樣就可檢測出HbE。異常血紅蛋白HbD是在鹼性緩衝液中其電泳遷移率如同HbS,而在PH6.2枸櫞酸緩衝液的瓊脂糖介質中,因HbS與HbA不能分離,這樣就可以分離和檢測出HbD。β-地中海貧血是HbA的合成受損,電泳圖譜可呈現HbA2與HbF區帶。
糖化血紅蛋白電泳
非濃縮尿蛋白電泳
腦脊液電泳

血清蛋白電泳正常參考值:

白蛋白:0.55~0.69
球蛋白α1: 0.03~0.08
球蛋白α2 :0.04~0.09
球蛋白β :0.10~0.18
球蛋白γ :0.04~0.13
腦脊液蛋白電泳主要用於多發性硬化症,神經梅毒及亞急性硬化性全腦炎等的診斷。

血清蛋白電泳的臨床意義

白蛋白增高:椎管阻塞,腦水腫,缺氧性腦病,格林-巴利綜合徵,結締組織疾病等。
球蛋白增高:神經梅毒,腦炎,多發性硬化症等。
在肝細胞受損時,血清白蛋白、α1球蛋白和α2球蛋白減少,同時受損趕下包作為自身抗原刺激淋巴系統,使λ球蛋白增加,知識肝病患者血清蛋白電泳的共同特徵。輕症急性肝炎時電泳結果多無異常,病情加重後白蛋白,α和β球蛋白減少,γ球蛋白增加。球蛋白增加的程度與肝炎的嚴重程度相關,如持續增高提示肝炎轉化為慢性。肝硬化時候白蛋白中毒或者高度減少,α1,α2和β球蛋白也有降低傾向,γ球蛋白明顯增加。肝細胞肝癌常與肝硬化並存在,故蛋白電泳圖像和肝硬化相似,但常有α球蛋白升高,偶可見甲胎蛋白帶的出現。

套用

臨床電泳

臨床中何時需要病人的電泳結果?

1.懷疑有多發性骨髓瘤病;
2.不明的外周神經病(糖尿病、毒素照射、化療除外);
3.根據其它實驗室的數據,需要做蛋白電泳
3.1總蛋白異常或白蛋白異常
3.2尿蛋白升高
3.3由於惡變而引起的血鈣過多(如臨床相關的症狀為失重,疲勞,骨痛,異常出血)
3.4WBC、RBC升高
4.臨床上出現如下症狀時
炎症疾病、自身免疫性疾病、腎病、肝病、蛋白質丟失的相關疾病

臨床蛋白電泳的地位

1.用於初篩,對疾病進行最初的評估;
2.避免漏診;
3.方法學穩定。

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