放射性同位素標記蛋白

Radiolabeled proteins放射性同位素標記蛋白

放射性同位素標記法檢測脂肪等組織中脂蛋白脂肪酶活性

脂蛋白脂肪酶活性測定國內常用滴定法和比色法,但這兩種方法都不夠靈敏和可靠.為準確檢測脂蛋白脂肪酶的活性,在中國首次建立了放射性同位素標記法,並用此方法檢測了基因體外表達的脂蛋白脂肪酶,以及攝食條件下C57小鼠肝素後血漿中及心肌、脂肪和肝臟組織中的脂蛋白脂肪酶的活性.測定使用含3H標記三油酸甘油酯的甘油乳劑為底物.標本與底物37℃孵育反應後通過抽提將甘油酯與游離脂肪酸分開.脂解產生的游離脂肪酸的放射活性與標本中脂肪酶的活性成正比.表達人脂蛋白脂肪酶的重組腺病毒感染培養的293A細胞後,肝素後培養液中表達很高的脂蛋白脂肪酶活性.5隻小鼠肝素後血漿及心肌、脂肪組織中脂蛋白脂肪酶活性檢測結果均值分別為314.3U/L以及349和61mU/g.結果表明,放射性同位素標記法用於脂蛋白脂肪酶基因表達的研究靈敏、準確和穩定.小鼠血漿和組織標本脂蛋白脂肪酶活性檢測為今後利用小鼠進一步研究脂蛋白脂肪酶提供了一些資料.