pc12

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PC-12細胞是一個常用的神經細胞株。PC-12細胞株來源於一種可移植的鼠嗜鉻細胞瘤,該細胞對神經生長因子(NGF)有可逆的神經元顯形反應,該細胞不合成腎上腺素。

簡介

: Rattus norvegicus (褐家鼠) (一種交感神經系統的腫瘤)

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注釋:PC-12細胞株來源於一種可移植的鼠嗜鉻細胞瘤,該細胞對神經生長因子(NGF)有可逆的神經元顯形反應,該細胞不合成腎上腺素。

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相關信息

培養液:Ham's F12K (含2 mM L-谷氨醯胺,1.5 g/L NaHCO3)+15%馬血清+2.5% 胎牛血清。 (也可用10%馬血清和5%的小牛血清)

傳代:吸去培養液。 加入新的培養液,用吸管吹下細胞或用手拍打培養瓶或刮下細胞到培養液中,用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:4為宜,傳代期間2-3天更換培養液)

凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。

PC12細胞來源大鼠腎上腺髓質嗜鉻細胞瘤,廣泛用於神經系統疾病的體外研究。

PC細胞培養和向神經元誘導分化

pc12細胞是從大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤克隆的細胞株,主要分泌產物為兒茶酚胺類遞質包括多巴胺、去甲腎上腺素等。膜上有NGF受體,受生理水平NGF誘導後,它們停止分裂,長出神經突起,分化為具有交感神經元特性的細胞,常被用於分析神經元分化和NGF作用分子機制的研究,也被用於研究生長因子調節神經細胞基因表達改變的機制。

(一)材料和方法

1,pc12細胞的復甦和培養

從液氮罐中取出盛有pc12細胞的塑膠螺口小瓶,立即投入37℃溫水中,並不時搖動令其儘快融化,然後從37℃水浴中取出塑膠螺口小瓶,用酒精消毒後用吸管吸出細胞懸浮液,注入離心管並加入10倍培養液,混合後離心(一千轉每分鐘,五分鐘)除去上清液,再重複用培養液洗一次。然後用培養液稀釋成1x十的四次方個每毫升密度的細胞懸液,接種於75平方厘米塑膠培養瓶中,每皿十毫升,置於37度含百分之十二氧化碳的培養箱內進行培養。培養液由百分之九十的DMEM、百分之五胎牛血清、百分之五馬血清、0.01%谷氨醯胺組成。

2,pc12細胞的擴增

pc12細胞培養5~10天,經0.25胰蛋白酶消化(37度,五分鐘)傳代,以1x十的四次方個每毫升密度接種於75平方厘米塑膠培養瓶中進行擴增培養。

3,體外誘導pc12細胞向交感神經元樣細胞分化

取傳五代以上pc12細胞,經消化分散後,製成5x十的五次方每毫升密度的細胞懸液,接種於塗有小牛皮膠的35mm塑膠培養皿中,每皿2ml,置於36度,10%co2的培養箱內進行培養。培養液由90%DMEM,5%馬血清、NGF20ng每毫升和谷氨醯胺0.10g/L組成。每周換液兩次,每次更換一半新鮮培養液。

(二)結果

1,pc12細胞 的生長發育和形態學特徵

pc12細胞種植後8小時,生長良好的pc12細胞開始分裂增殖並凝聚成團生長,pc12細胞呈圓形,胞體周圍有暈光。培養5~10天后,分裂增殖的pc12細胞已形成密集的細胞簇,布滿整個培養瓶。

2,體外誘導pc12細胞向交感神經元樣細胞分化

分散的pc12細胞在含NGF的培養條件培養3天后,pc12細胞開始停止分裂。並逐漸分化為具有交感神經元特徵的細胞,開始長出神經突起,培養5天后,大多數pc12細胞轉變為類似於交感神經元的形態,突起逐漸增多並延長,形成稀疏的網路。隨著培養時間的延長,交感神經元樣細胞的胞體逐漸增大,胞體主幹和分支逐漸延長並增粗,經NSE免疫組織化學染色呈陽性反應。

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