T4 DNA聚合酶

T4 DNA聚合酶是一種模板依賴的,可以在結合有引物的單鏈DNA 模板上,從5'→3'方向催化DNA合成反應的DNA聚合酶。

簡介

T4DNAPolymerase,即T4DNA聚合酶,是一種模板依賴的DNA聚合酶,可以在結合有引物的單鏈DNA模板上,從5'→3'方向催化DNA合成反應。T4DNAPolymerase具有3'→5'外切酶活性,但不具有5'→3'外切酶活性。
特點:T4DNAPolymerase由於同時具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性,可以用於將5'端突出末端補平或3'端突出末端削平。T4DNAPolymerase的3'→5'DNA外切酶活性對於單鏈DNA要比雙鏈DNA活性更高,即單鏈DNA要比雙鏈DNA中的非配對鏈部分更容易被T4DNAPolymerase所消化。T4DNAPolymerase的3'→5'外切酶活性比KlenowFragment要高約200倍。

用途:T4DNAPolymerase可用於催化以下反應:DNA5'或3'突出末端的平滑化;通過置換反應進行標記DNA探針合成;定點突變過程中第二鏈的合成;不依賴於連線反應的PCR產物克隆。
來源:本T4DNALigase由大腸桿菌表達,表達基因的來源為T4嗜菌體。
活性定義:37℃30分鐘時間內,催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件:67mMTris-HCl(pH8.8),6.7mMMgCl2,1mMDTT,16.7mM(NH4)2SO4,0.2mg/mlBSA,0.033mMofeachdNTP,0.4MBq/ml[3H]-dTTP,0.2mM熱變性且經DNA酶部分消化過的小牛胸腺DNA。
純度:不含DNA內切酶,不含RNase。
酶儲存溶液:20mMpotassiumphosphate(pH7.5),200mMKCl,2mMDTT,and50%glycerol。
ReactionBuffer(5X):335mMTris-HCl(pH8.8at25℃),33mMMgCl2,5mMDTT,84mM
(NH4)2SO4。
緩衝液兼容性:在碧雲天的內切酶反應緩衝液1XO、1XR、1XY、2XY中的活性為100%,在1XB、1XG中的活性為75-100%。
失活或抑制:70℃加熱10分鐘可使T4DNAPolymerase失活。金屬離子螯合劑可以抑制T4DNAPolymerase的活性。

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