鬼筆環肽

鬼筆環肽

鬼筆環肽(phalloidin 鬼筆鵝膏素),從一種毒性菇類中分離的劇毒生物鹼,C35H48N8O11S。無色,細針狀結晶,系從毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)中得到的有毒的環狀七肽。鬼筆環肽可以與聚合的微絲結合的特殊性質使得它具有一個頗富前景的用途:通過讓這種毒素吸附於 螢光染料上面,研究人員可以研究細胞的內部工作機制,窺視細胞如何分裂。與 鵝膏蕈鹼(amanitin)一起存在。毒性比鵝膏蕈鹼弱,對小鼠的 致死劑量是50微克,對人體也有很強的毒性,可引起流涎、嘔吐、便血、發紺、痙攣、肌肉攣縮,以致死亡。鬼筆環肽的分子量小,很容易通過細胞,不需要對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。

鬼筆環肽

鬼筆環肽鬼筆環肽

與 鵝膏蕈鹼(amanitin)一起存在,毒性比鵝膏蕈鹼弱,對小鼠的 致死劑量是50微克,對人體也有很強的毒性,可引起流涎、嘔吐、便血、發紺、痙攣、肌肉攣縮,以致死亡。它同 細胞鬆弛素B的作用相反, 只與聚合的 微絲結合, 而不與肌動蛋白單體分子結合。它同聚合的微絲結合後, 抑制了微絲的解體, 因而破壞了微絲的聚合和解聚的動態平衡。鬼筆環肽可以與聚合的微絲結合的特殊性質使得它具有一個頗富前景的用途:通過讓這種毒素吸附於 螢光染料上面,研究人員可以研究細胞的內部工作機制,窺視細胞如何分裂。通過這些觀察,他們可以揭開 癌症工作機制和組織生長之謎。

美國 加州大學聖克魯斯分校的兩位 化學家斯科特·洛基和蘿拉·舒利斯科(Laura Schuresko)利用一種稱為 固相合成(solid-phase synthesis)的手法,製造出這種致命物質。他們不是將幾種 化學物質放入燒瓶混合,讓它們自由飄浮,而是在 化學反應期間對其中一種化學物質進行適當約束,這樣一來,研究人員在複雜的化學反應過程中可以更好地對其進行 控制。

FITC和Rhodamin等螢光物質標記的鬼筆環肽可特異的與 真核細胞的F-actin結合,從而顯示 微絲骨架在細胞中的分布。

鬼筆環肽的配製

0.1mg鬼筆環肽溶於1ml無水甲醇(也可用DMSO或無水乙醇溶解)配成貯存液,可在-20度避光的條件下長期保存,工作液的濃度為5ug/ml,由貯存液加 生理鹽水PBS稀釋20倍即可。

染色程式

生理鹽水PBS清洗細胞2次,每次10分鐘;

3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘, 生理鹽水PBS清洗細胞2次;

加入5ug/ml的FITC-鬼筆環肽室溫染色30-60分鐘,夏季時間可以短一些, 生理鹽水PBS清洗細胞2次;

DAPI或hoechst33258染細胞核10分鐘, 生理鹽水PBS清洗 細胞2次;

吸去多餘水分,加螢光封片液(中性或偏鹼性緩衝液加等量甘油),蓋上 蓋玻片,螢光或 共聚焦顯微鏡下觀察。

注意事項

鬼筆環肽的分子量小,很容易通過細胞,不需要對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。

藥品價格昂貴,0.1mg的售價接近兩千元,要節約 使用。

毒性較大,戴上手套操作。

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