葡萄球菌A蛋白

葡萄球菌A蛋白

葡萄球菌A蛋白所屬現代詞,指的是存在於葡萄球菌細胞壁的一種表面蛋白。

基本內容

(Staphylococcal protein A,SPA),是存在於葡萄球菌細胞壁的一種表面蛋白。

SPA可與人類和多種哺乳動物IgG的Fc段結合。SPA與IgG結合後的複合物具有抗吞噬、促細胞分裂、引起超敏反應、損傷血小板等多種生物學活性。

葡萄球菌A蛋白葡萄球菌A蛋白

另一方面,SPA與IgG Fc結合後IgG(除了IgG3)的Fab段仍能特異性結合抗原,可用於協同凝集試驗,檢測多種細菌抗原或抗原抗體複合物。 SPA也是一種B細胞絲裂原,可使多克隆B細胞活化和增殖。

SPA的性質

(1)SPA存在於大多數(90%)金黃色葡萄球菌中,而不存在於表皮葡萄球菌中。並且主要存在於血漿凝固酶陽性菌株,而不存在於陰性菌株中。前者是致病的,後者是非致病的,但在體內研究中尚未發現SPA和菌株致病性之間有任何肯定的關係。不同菌株間的SPA含量有明顯差異,以I株金黃色葡萄球菌含SPA量最高,SPA和細胞壁的肽聚糖呈共價結合。抗二甲氧基苯青黴素突變株(Methicillin―resistantstrain)能產生分泌性SPA,它較之細胞壁所含的SPA在免疫學性質上相似,但易分離,損失少。
(2)SPA為蛋白質成分,僅含少量或不含碳水化合物,其分子量因提取方法不同而異,用脫氧核糖核酸酶消化細胞壁後超速離心或用加熱油提法,所測分子量為12000~15000。用沉澱平衡分析和在6mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽中凝膠過濾,測出分子量為42000。SPA為多肽單鏈,內含3個高度相似的Fc段結合區,每區由50個以上的胺基酸組成,不含色氨酸和半胱氨酸。其羧基末端是賴氨酸,氨基末端結構尚未肯定。SPA粘度高於球蛋白,等電點為pH5.1,其天然結構十分穩定,在套用6mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽變性劑的條件下,尚能保存某些三級結構,如將此變性劑除去,則能自然矯正而恢復原有結構。
(3)SPA之所以引起免疫學家的重視,是因為它具有的免疫學特性。SPA具有和人與許多動物如豚鼠、豬、小鼠、猴等IgG結合的能力。SPA結合部位是Fc段而不是Fab段,這種結合不會影響抗體的活性。SPA具有的結合力是雙價的,每個SPA分子可以同時結合兩個IgG分子,也可一方面同IgG相結合,一方面與標記物如螢光素、過氧化物酶、膠體金和鐵蛋白等相結合。還有一個饒有興趣的事實是,和SPA結合後的IgG可用4mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽等使之解離。SPA對IgG免疫球蛋白亞型的結合有選擇性,如SPA與人IgG亞型:IgG1、IgG2、和IgG4有結合力,唯獨不結合IgG3。只結合IgA2,而不結合IgA1。SPA和禽類血清IgG不結合。
(4)SPA具有多種生物學作用,如引起豚鼠解離體迴腸和收縮,在吞噬反應中抑制IgG調理素吞噬和殺菌作用,SPA―Igg複合物能固定人的補體和人、狗、豬的新鮮補體,對人類B細胞具有促有絲分裂因子的作用等。

SPA的套用

自70年代開始,國外套用SPA建立了許多敏感、特異性強、快速和簡易的 實驗方法 ,並在許多方面的套用中積累了實際套用的材料,現已廣泛套用到免疫學及其相關科學如細胞學、細菌學和病毒學等。其可能套用的範圍可歸納為以下四個方面:
1.套用於免疫球蛋白的製備和分析 SPA是一種比較理想的提純和分析免疫球蛋白的 試劑 。由於SPA與IgG及其某些亞型的Fc段有較強的結合力,可利用來提純、分析免疫球蛋白製劑,結合後的PSA―IgG可再用解離劑如4mol/L尿素、4mol/L,硫氰酸鹽或6mol/L的鳥嘌呤鹽酸鹽使之解離,多用SPA―Sepharose層析柱分離IgG或其亞型及斷片如Fc、Fab等。
2.套用於免疫細胞化學 由於SPA具有雙價結合力,在免疫細胞化學技術中可作為橋抗體或標記抗體。由於SPA能與多種動物的IgG的Fc段結合,因此,作為第二抗體或標記抗體,SPA的最大優點是不受種屬特異性的限制,故在目前各種免疫細胞化學技術中已得到廣泛的套用。除不受種屬限制這一特點外,SPA法還具有染色時間短、靈敏性高和背景染色淡等優點。據報告用國產酶聯SPA代替酶標記抗體,套用間接染色,時間較PAP法省時一半。SPA分子量小(13000~42000),易於穿透組織,而免疫球蛋白酶標記抗體為200000,PAP複合物為430000,均較SPA分子量大。
3.套用於多種細菌、支原體和病毒等病原體的簡易快速診斷可套用SPA菌體作為 載體 ,結合特異性抗體成為一種吸附原,作協同凝集劑,用於某些細菌和病毒的定群和分型(詳見第二章 第三節 )。
4.可作為一種研究免疫複合物、膜抗原、膜受體和膜Ig的固相吸附劑 Hallgsen用同位素標記SPA測定血IgG的凝集物,發現85%全身性 紅斑狼瘡 和42%類風濕病人血清中凝集物增高。SPA用於細胞膜抗原、表面IgG和Fc受體的研究最大特點是能研究活細菌。Ghetie(1976)用SPA致敏綿羊紅血球,與經IgG處理的細胞形成玫瑰花環,來鑑定帶Fc受體的細胞,反之,如用SPA抑制玫瑰花環形成,則可定量測定細胞表面的IgG。套用SPA與膠體金或鐵蛋白相結合,可在電鏡水平檢查抗原抗體反應的定位。特別是蛋白A―膠體金技術(ProteinA―Goldtechnique,PGA技術)自Pomano和Romano(1977)首次報告用於標記細胞表面抗原、包括淋巴細胞、血小板、大鼠腎臟細胞及感染的病毒細胞獲得成功以後,已得到愈來愈廣泛的套用(詳見第七章 ),是一種較為理想的免疫電鏡技術。自70年代開始,國外套用SPA建立了許多敏感、特異性強、快速和簡易的 實驗方法 ,並在許多方面的套用中積累了實際套用的材料,現已廣泛套用到免疫學及其相關科學如細胞學、細菌學和病毒學等。其可能套用的範圍可歸納為以下四個方面:
1.套用於免疫球蛋白的製備和分析 SPA是一種比較理想的提純和分析免疫球蛋白的 試劑 。由於SPA與IgG及其某些亞型的Fc段有較強的結合力,可利用來提純、分析免疫球蛋白製劑,結合後的PSA―IgG可再用解離劑如4mol/L尿素、4mol/L,硫氰酸鹽或6mol/L的鳥嘌呤鹽酸鹽使之解離,多用SPA―Sepharose層析柱分離IgG或其亞型及斷片如Fc、Fab等。
2.套用於免疫細胞化學 由於SPA具有雙價結合力,在免疫細胞化學技術中可作為橋抗體或標記抗體。由於SPA能與多種動物的IgG的Fc段結合,因此,作為第二抗體或標記抗體,SPA的最大優點是不受種屬特異性的限制,故在目前各種免疫細胞化學技術中已得到廣泛的套用。除不受種屬限制這一特點外,SPA法還具有染色時間短、靈敏性高和背景染色淡等優點。據報告用國產酶聯SPA代替酶標記抗體,套用間接染色,時間較PAP法省時一半。SPA分子量小(13000~42000),易於穿透組織,而免疫球蛋白酶標記抗體為200000,PAP複合物為430000,均較SPA分子量大。
3.套用於多種細菌、支原體和病毒等病原體的簡易快速診斷可套用SPA菌體作為 載體 ,結合特異性抗體成為一種吸附原,作協同凝集劑,用於某些細菌和病毒的定群和分型(詳見第二章 第三節 )。
4.可作為一種研究免疫複合物、膜抗原、膜受體和膜Ig的固相吸附劑 Hallgsen用同位素標記SPA測定血IgG的凝集物,發現85%全身性 紅斑狼瘡 和42%類風濕病人血清中凝集物增高。SPA用於細胞膜抗原、表面IgG和Fc受體的研究最大特點是能研究活細菌。Ghetie(1976)用SPA致敏綿羊紅血球,與經IgG處理的細胞形成玫瑰花環,來鑑定帶Fc受體的細胞,反之,如用SPA抑制玫瑰花環形成,則可定量測定細胞表面的IgG。套用SPA與膠體金或鐵蛋白相結合,可在電鏡水平檢查抗原抗體反應的定位。特別是蛋白A―膠體金技術(ProteinA―Goldtechnique,PGA技術)自Pomano和Romano(1977)首次報告用於標記細胞表面抗原、包括淋巴細胞、血小板、大鼠腎臟細胞及感染的病毒細胞獲得成功以後,已得到愈來愈廣泛的套用(詳見第七章 ),是一種較為理想的免疫電鏡技術。

相關詞條

相關搜尋

熱門詞條

聯絡我們