簡介
睪丸酮叢毛單胞菌(C.testosteroni)是叢毛單胞菌屬(Comamonas)的一個種,在自然界中分布廣泛,為條件致病菌,可引起呼吸道等部位的感染。國外已有從血液、膿液、尿液和呼吸道分泌物等臨床標本分離出該菌的報導。我們從血液培養中連續兩次分離出同一種睪丸酮叢毛單胞菌。睪丸酮叢毛單胞菌(C.testosteroni)是叢毛單胞菌屬(Comamonas)的一個種,在自然界中分布廣泛,為條件致病菌,可引起呼吸道等部位的感染。國外已有從血液、膿液、尿液和呼吸道分泌物等臨床標本分離出該菌的報導,但作者尚未見國內有關報導。
血液中分離出睪丸酮叢毛單胞菌
睪丸酮叢毛單胞菌（comamonastrstosteroni）是叢毛單胞菌屬的一個種，在自然界巾分布廣泛，為條件致病菌．可引起呼吸道等部位的感染。國內尚未見從血液中分離出該菌的報導。我們從血液培養中連續兩次分離出同一種睪丸酮叢毛單胞菌。而睪丸酮叢毛單胞菌胞菌在降解類固醇、多環芳烴類物質PHAs等穩定原始菌株只具有Amp抗性，只能生長在含Amp的污染化合物中具有重要作用CoulterandTalalay培養基中生長，不能在含有這兩種抗生素的培養基1968GoyalandZylstra1996mobusetal.1997中生長。MobusandMaser1998Maseretal.20002001bpM12Skowaschetal.2002，在污染環境修復中扮演著重要的角色。睪丸酮叢毛單胞菌的3琢HSD/CR是一種1500010000誘導酶，在該細菌染色體上3琢HSD/CR基因的上游75005000存在兩個10bp的回文操縱基因序列，該基因附近還存在兩個抑制子RepA和RepB，通過轉錄和翻譯抑25002000制該基因的表達XiongandMaser2001Xiongetal.20012003abc。1000活化因子activator是指與增強子或與活化因子750結合區域結合的蛋白，能夠提高轉錄的起始速度500BrowningandBusby2004。戴藝民等20052006將250來自睪丸酮叢毛單胞菌的全長564bp和部分409100bpactivator分別與來自睪丸酮叢毛單胞菌的3琢HSD/CR在體外進行共轉化研究，
結果表明睪丸
1PCR篩選工程菌酮叢毛單胞菌的activator能提高3琢HSD/CR轉錄Figure1GeneticallyengineeredbacteriascreenedbyPCR速率。C.WiderangeDNAmarker100150001：testpaM：由於人工合成和生物自身代謝排入環境中的類C.2：testpb固醇污染物與日俱增，有必要對睪丸酮叢毛單胞菌.基因工程菌的Southern檢測進行改造，提高該細菌的3琢HSD/CR等一系列降解酶基因的表達，才能達到利用睪丸酮叢毛單胞菌快提取睪丸酮叢毛單胞菌野生菌在圖中簡寫為速降解該類污染物、淨化環境的目的。本研究利用電C.C.test，下同、testpa和C.testpb的染色體穿孔法將重組質粒pKtac1act1和pKtac1act2整合DNA，EcoR玉酶切後進行雜交檢測，ddH2O作用以化入睪丸酮叢毛單胞菌的染色體中，篩選得到2株為陰性對照，以EcoR玉酶切pKtac1作為陽性對照。睪丸酮叢毛單胞菌基因工程菌，對這兩株基因工程Southern雜交的結果見圖2。從Southern雜交圖可菌的關鍵酶3琢HSD/CR表達情況和細菌穩定性進見，基因工程菌C.testpa和C.testpb的染色體行檢測分析，以期為進一步利用工程菌提供理論基DNA有明顯的雜交條帶，睪丸酮叢毛單胞菌的染色礎。體DNA沒有雜交條帶的出現。由於睪丸酮叢毛單胞菌的染色體上不存在pK18的片段，而在挑選出來的1結果與分析基因工程菌的染色體上能夠檢測到pK18的片段的1.1利用PCR篩選基因工程菌存在，由此可見質粒pKtac1act1和pKtac1act2確實整合入睪丸酮叢毛單胞菌的染色體中。質粒電穿孔轉化後的細菌在含有Amp和Kan的LB固體培養基上30℃過夜培養。挑選單克隆在1.3睪丸酮對細菌的誘導含有Amp和Kan的LB液體培養基中進行過夜振睪丸酮叢毛單胞菌的3琢hsd/CR是受睪丸酮誘盪培養，提取重組子的染色體DNA作為模板，A1以導的酶。在LB培養基中添加睪丸酮對Comamonas和A2為引物進行PCR擴增，擴增產物用1.0的瓊C.testosteroni、testpa和C.testpb進行過夜培養，脂糖凝膠進行電泳圖1。篩選到2株基因工程菌，睪丸酮的終濃度為270滋g/mL。分別提取這3個菌即質粒pKtac1act1同源整合入睪丸酮叢毛單胞菌株的總蛋白，將細菌的總蛋白定量為1mg/mL，稀釋染色體產生的工程菌C.testpa和質粒pKtac1act2100倍後，用ELISA法檢測3琢HSD/CR的表達量，同源整合入睪丸酮叢毛單胞菌染色體產生的工程菌結果如圖3所示。從圖中可見，睪丸酮叢毛單胞菌野睪丸酮叢毛單胞菌工程菌構建及穩定性分析
