瑞氏染料
由酸性染料伊紅（E-）和鹼性染料亞甲藍（M+）組成。伊紅通常為鈉鹽，有色部分為陰離子。亞甲藍（又名美藍）為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構。通常為氯鹽，即氯化美藍，有色部分為陽離子。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料（即天青）。將適量伊紅、美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅；二是固定細胞形態。
染色原理
既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質不同，對各種染料的親和力也不一樣。如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為鹼性蛋白質，與酸性染料伊紅結合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質；細胞核蛋白、淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞胞質為酸性，與鹼性染料美藍或天青結合，染紫藍色或藍色，稱為嗜鹼性物質；中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染淡紫紅色，稱為嗜中性物質、原始紅細胞、早幼紅細胞胞質、核仁含較多酸性物質，染成較濃厚的藍色；中幼紅細胞既含酸性物質，又含鹼性物質，染成紅藍色或灰紅色；完全成熟紅細胞，酸性物質徹底消失後，染成粉紅色。
染液配製
溶劑
用 甲醇作瑞氏 染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：
（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。 在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多餘 美藍就可以 使胞漿染成藍色，染色主要是化學作用，是離子彼此結合的反應。
（ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由於甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應。
瑞氏染液配製：
瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先稱乾燥（事先放入溫箱乾燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內， 用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲 即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入 一 清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重複數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。
緩衝液
1) 緩衝液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH 值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩衝液須保持 一定的 pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏鹼性染料可與緩衝液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基起中和作用，使 pH 恆定。
2) 緩衝液配製（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封，防止黴菌污染，如有污染則應報廢。
pH的影響
（pH6.4～pH6.8）
細胞各種成分均屬蛋白質，因蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環境中正電荷增多，易與伊紅結合，紅細胞和嗜酸性粒細胞染色偏紅，細胞核呈淡藍色或不染色；在偏鹼性環境中負電荷增多，易與美藍結合，所有細胞呈灰藍色，顆粒呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色。稀釋染液必須用緩衝液，沖洗用水應近中性，否則可導致細胞染色呈色異常，形態難以識別，甚至錯誤。
染色方法和注意事項
（1）血塗片乾透後固定，否則細胞在染色過程中容易脫落。
（2）沖洗時應以流水沖洗，不能先倒掉染液，防染料沉著在血塗片上。沖洗時間不能過久，以防脫色。如血塗片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然後立即用流水沖洗。
（3）染色過淡可以復染，復染時應先加緩衝液，然後加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡，也可用甲醇脫色。
（4）瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇（AR級以上）和甘油組成，Ⅱ液為PBS（pH6.4～pH6.8）。
