核苷酸激酶

核苷酸激酶是由T偶數噬菌體所感染的大腸桿菌分離出來的酶。

核苷酸激酶

本酶具有以下活性:
1.5'-OH末端寡核苷酸的磷酸化:5'-OH+NTP→5'-P+NDP
2.5'-P末端寡核苷酸的去磷酸化:5'-P+NDP→5'-OH+NTP(最適pH:6.2)
3.交換反應:5'-P+NTP+NDP5'-P+NDP+NTP
4.3'磷酸酶(Phosphatase)活性:
(Poly)nucleotide3'-P→(Poly)nucleotide3'-OH+Pi(最適pH:5.9)
※磷酸酶活性在肽鏈的C-末端附近,激酶活性在N-末端附近。

簡介

活性定義
以MicrococcalNuclease處理的小牛胸腺DNA為底物,在37℃.pH7.6的條件下,30分鐘內使1nmol的[g-32P]ATP摻入酸不溶性沉澱物所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。

純度
10U的本酶和1mg的l-HindIII片段在37℃下反應24小時,DNA的電泳譜帶不發生變化。
1U的本酶和1mg的16S,23SrRNA在37℃下反應24小時,RNA的電泳譜帶不發生變化。

用途
DNA及RNA5'末端的標記。
合成DNA接頭(Linker)的5'末端磷酸化。

相關資料

由T偶數噬菌體所感染的大腸桿菌分離出來的酶,能催化ATP的γ-磷酸轉移到DNA或RNA的5′-OH末端生成ADP的反應。EC2.7.1.78。因為此酶的催化反應特異性很高,可用32P標記的ATP特異地標記多核苷酸的5′末端。廣泛套用於多核苷酸的鏈長的測定和5′末端核苷酸排列的確定等核酸結構的研究。

核酸酸基擴增技術(SELEX)可從極大容量的隨機寡核苷酸文庫中篩選得到與靶分子高特異性和高親和力結合的核酸配基。對寡核苷酸進行化學修飾,可以提高核酸配基的穩定性,增加其功能多樣性及生物利用度。SELEX在基礎研究、診斷和治療試劑的研製及藥物篩選等領域有廣泛用途。

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