簡介
胞共培養體系是一種輔助生殖技術 。從她自己的子宮內膜細胞層之上的是將患者的受精卵，胚胎髮育創造一個更自然的環境，並最大限度地在體外受精（IVF）懷孕的機會。體外培養
材料和方法
1.1 子宮內膜組織標本的獲取標本均來自於湘雅附三醫院和省婦幼門診手術室。育齡女性，年齡18～45歲，月經周期規則，刮宮前3個月內未服用過激素類藥物，如避孕藥、氟滅酸等影響內分泌的藥物, 刮取子宮腔前、後壁正常內膜各2條，行刮宮術獲取子宮內膜。將刮取的內膜組織置入盛有400U/ml青黴素，100U/ml鏈黴素的冰D-hanks液無菌瓶中，並低溫條件下30min內送實驗室進行處理培養。部分內膜組織送病理學檢查，根據月經周期和病理診斷來確定子宮內膜分期,且組織學診斷未發現子宮內膜有病理性改變,內膜組織學分期與實際月經周期相符。
1.2 試劑及儀器
主要試劑及儀器：DMEM/F12培養基（Hyclone公司），新生胎牛血清(三利生物製品廠)，胰蛋白酶、透明質酸酶、膠原酶I(均為Sigma公司)，鼠抗人波形蛋白單克隆抗體（Vim，ZM-0073）、鼠抗人細胞角蛋白18（CK18，ZM-0260）單克隆抗體、即用型SABC免疫組化染色試劑盒、濃縮型DAB試劑盒（均為北京中杉金橋生物技術有限公司）。水套式CO2培養箱（2300型，SHEL-LAB生產），超淨工作檯（SW-CJ-IF，蘇州安泰空氣技術公司）,倒置相差顯微鏡（XD-101型，南京江南光電股份有限公司），台式多管自動平衡離心機（TDZ5-WS，長沙平凡儀器儀表有限公司）。
1.3 方法
1.3.1子宮內膜細胞的培養
將挑取的子宮內膜組織，在D-hanks液中反覆涮洗，去除血污。剪成1mm(肉眼成糊狀)左右的小塊，加入3倍體積的複合消化酶（0.25%胰蛋白酶-EDTA、0.1%膠原酶、0.1%透明質酸酶）,充分混勻後置37℃恆溫水浴靜置消化20min，留上清液於無菌離心管中並加入含20%無菌小牛血清的DMEM/F12培養液終止上清液消化。同法再消化6次，每次20min，1000r/min離心5min，棄上清液，用巴氏吸管吹打成細胞懸液，並計數。滴板計數並調整細胞濃度（台盼蘭染色細胞活力>95%）。以 5.0×10個/ml接種，接種於盛有DMEM/F12培養液的25cm一次性培養瓶中，置37℃、5%CO2、99%濕度的CO2培養箱中培養過夜。次日換液，清除污染的紅細胞和未貼壁細胞。繼續培養時，每48或72小時換液。待細胞融合後即可用胰蛋白酶-EDTA消化傳代。
1.3.2細胞生長的觀察及鑑定
倒置顯微鏡下觀察：用普通倒置相差顯微鏡觀察培養的子宮內膜細胞的形態及生長規律並拍照。HE染色：①細胞爬片的製備：將傳代的細胞消化製成細胞懸液，接種到放置經多聚賴氨酸包被過的裝有蓋玻片6孔培養板中，貼壁後換液繼續培養，待細胞長成單層後取出蓋玻片，用-20℃純丙酮固定30min，晾乾，室溫保存備用。②染色、封片。③光鏡下觀察。
免疫組化：①細胞爬片的製備（方法同HE染色）。②分別加入按1：50稀釋的鼠抗人波形蛋白單抗和細胞角蛋白單抗，4℃冰櫃過夜，並設陰性對照組（用PBS代替一抗），採用鏈黴素活素—生物素—過氧化物酶法（SABC）法染色。③光學顯微鏡觀察。
1.3.3周期分析
胰蛋白酶-EDTA消化用於細胞周期分析的培養細胞，DMEM/F12重懸後移至1.5 ml離心管中，冰PBS清洗2遍後，2000轉5分鐘離心，加入PBS配製的75%冰乙醇，4 ºC固定過夜後，進行流式細胞儀測定細胞周期。
結果
2.1 子宮內膜細胞培養生長情況 細胞接種24h後大部分都能貼壁。隨著消化時間的延長，各個時間間段的細胞數量及形態均在不斷發生改變，當消化20、40 min的細胞雖然數量比較多但其中有很多紅細胞；消化120、140min時，只有少量細胞存在。培養3～4天之後，消化20、40min的細胞數量漸減少, 細胞體積小，形態圓形。隨著培養時間的延長，消化20、40、120、140min的細胞都沒有培養成功。原代細胞生長很慢，但傳代後生長旺盛5～7d可以鋪滿。消化60、80、100 min的細胞中有呈管狀或葡萄狀的EEC和圓形的ESC。2.2 子宮內膜細胞生長的形態學特點 消化60、80、100 min的細胞中均有2種形態的細胞存在，一種是ESC呈多邊形或梭形，培養初期呈極性生長，培養3～4天后細胞排列無極性，平鋪生長，呈現中間稍寬，兩端尖的形態，外形輪廓不甚清楚，不明顯，細胞之間平行排列居多，細胞質薄而透明，核居中，呈圓形或橢圓形。另一種細胞是EEC呈多角形或蝌蚪形，培養5～6天后細胞呈漩渦狀排列，細胞間出現拉網現象，排列緊密，且常圍繞成細胞小團，細胞輪廓清晰，細胞質呈顆粒狀，核圓而大，核仁明顯。增殖期的細胞以ECS為主；分泌期的細胞以EEC為主。
2.3 HE染色 子宮內膜細胞經HE染色後，細胞形態與活細胞無明顯區別。胞核均呈紫藍色，胞質均呈粉紅色 (圖A、B)。
2.4 細胞鑑定 陽性細胞胞質染成棕黃色，核呈藍色(圖C～E)。本實驗顯示增殖期的細胞免疫組化染色波形蛋白陽性細胞﹥95%，角蛋白陽性細胞<5%（圖C、D）；分泌期的細胞免疫組化染色角蛋白陽性細胞﹥95%，角蛋白陽性細胞<5%（圖E）。對照組表達陰性。
2.5 流式細胞儀觀察細胞周期 S期細胞約為38.3%，S+G2+M期的細胞約有46.4%活躍於增殖期，而處於G0/G1期的細胞占53.6%左右
培養步驟
一個典型的共培養周期包括以下步驟：1、 一旦病人已被認為是一個合適的人選的過程中，她經歷了子宮內膜活檢，在此期間，她的子宮內膜的一小片被刪除。
2、 子宮內膜樣本被傳送到一個研究實驗室，在那裡它被處理，純化並冷凍。
3、病人經歷了一個典型的試管嬰兒周期，並給予藥物，以刺激卵子的生長，在她的卵巢 。
4、 病人的卵子被檢索並與精子培育。 此時，實驗室開始解凍和不斷增長的她的子宮內膜細胞。
5、 一旦確認了受精，患者的胚胎放在（解凍）子宮內膜細胞。
6、在接下來的兩天中，胚胎的成長和發展密切監察。
7、 病人的胚胎移植到她的子宮著床和妊娠 。
效果與風險
共培養可以是一種有效的治療病人誰沒有以前的IVF周期或有胚胎質量差。12,377胚培養的研究表明，子宮內膜共培養顯著優於序貫培養介質，達到囊胚率（分數）分別為56%和46%，共存與順序系統，分別用自己的卵母細胞。卵子從卵子捐贈率分別為71%和56%，分別懷孕率分別為39%和28%，著床率分別為33%和21%。 [1]
除了非侵入性和相對無痛苦，共培養，可以在很短的辦公室訪問。該程式還可以改善胚胎質量及促進胚胎髮育。
共培養的風險是最小的。程式已經在超過1000名患者進行胚胎髮育沒有不利影響。併發症包括子宮內感染或損傷引起的胚胎活檢是極為罕見的。
