不對稱PCR

不對稱PCR是利用 不等量的一對引物來產生大量單鏈DNA (ssDNA)的方法。不對稱PCR製備的單鏈 DNA在用於序列測定時不必在測序之前除 去剩餘引物,簡化操作、節約人力物力。另 外,用cDNA經不對稱PCR進行序列分析 或SSCP分析也是現在研究真核外顯子的常用方法。根據實驗設計的不同,不對稱 PCR又可分為引物濃度不對稱PCR和熱不對稱PCR。(侯一平)

這兩種引物分別稱為限制性引物與非限制性引物;其最佳比例一般為1:50~1:100,關鍵是限制引物的絕對量。限制性引物太多太少,均不利於製備ss-DNA。也可用普通PCR製備靶DNA雙鏈DNA(ds-DNA),再以ds-DNA為模板,只用其中一種過量引物進行單引物PCR製備ss-DNA。

產生的ds-DNA與ss-DNA由於分子量不同可以在電泳中分開,而得到純ss-DNA。

不對稱PCR主要為測序製備ss-DNA,尤為用c-DNA經不對稱PCR進行DNA序列分析是研究真核DNA外顯子的好方法。

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