技術原理
首先,使用引物擴增目標 SNPs 所在片段,在擴增產物中加入核酸外切酶 I(Exo I)和鹼性磷酸酶(Shrimp Alkaline Phosphatase,SAP)消化掉反應體系中的引物序列和剩餘的 dNTPs;然後,以純化後的擴增產物為模板,使用測序酶、四種螢光標記ddNTP和 5′-端緊靠 SNP位點的延伸引物進行 PCR 反應,引物延伸一個鹼基即終止,經ABI測序儀檢測後,根據峰的移動位置確定該延伸產物對應的SNP位點,根據峰的顏色可得知摻入的鹼基種類,從而確定該樣本的基因型。通常用於10~30個SNP位點分析 。
優勢
1.分型準確;2.通量高:也稱小測序;3.檢測速度快;4.不受SNP位點多態性特性限制;5.不受樣本個數限制;