基本信息
作者：吳曉珺,李琳
作者單位：武漢市普愛醫院、武漢市第一醫院
來源：醫學期刊 / 醫藥科學綜合
寫作目的
探討電化學發光免疫分析法(ECLIA)測定血漿C肽的效果及臨床套用價值。方法：採用電化學發光免疫分析法和酶聯免疫分析法(ELISA)分別測定糖尿病病人的血漿C肽含量,並用電化學發光免疫分析法同時測定胰島素含量,並對測定結果通過SPSS統計軟體進行相關統計分析。結果：ECLIA測定C肽的平均批內與批間變異係數分別為2.13 %,4.27 % ,平均回收率是98.9 %,靈敏度為0.01 ng/mL; ELISA法的平均批內與批間變異係數分別為10.8 %,16.5 %,平均回收率是91.9 %,靈敏度為0.06 ng/mL; ECLIA 及ELISA 法所測C肽含量與ECL IA法所測胰島素含量均呈正相關( r = 0. 96, r =0.89 , P 均< 0. 05) 。結論：ECLIA 法測C肽的各技術參數優於ELISA 法,且操作簡便,檢測速度快,具有重要臨床套用價值。
英文翻譯
Clinical Evaluation of Electro Chemiluminescence Immunoassay for Determination of C-Peptide in Plasma
WU Xiao-jun ,LI Lin
(The Puai Hospital of Wuhan,Wuhan,HuBei 430030, China)
Abstract: Objective To evaluate the clinical effectiveness of the detection of Connecting Peptide (C-Peptide) in plasma by electro chemiluminescence immunoassay (ECLIA). Methods Plasma C-Peptide of diabetic patients was detected by ECLIA and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Insulin was measured by ECLIA simultaneously. Using SPSS software for analysis. Results The coefficient of variations (CVs) of within run and between run of ECLIA was2.13 %, 4.27
%respectively, while that of ELISA was 10.8 % and 16.5 %. The limit of detection of ECLIA was 0.01 ng/mL and ELISA was 0.06ng/mL.The average rate of recovery of ECLIA was 98.9 % and ELISA was 91.9 %. The concentration of plasma c-peptide measured by both ECLIA and ELISA was positively correlated with insulin (r = 0.96, r = 0.89, P < 0.05). Conclusion All the technical parameters of ECLIA in measuring C-Peptide are more efficient than those of ELISA. This method is important valuable for clinical application because it is easy and quick to do.
Key words: C- Peptide; ECLIA; ELISA
方法介紹
C肽（Connecting Peptide，CP）又稱連線肽，與胰島素都是由胰島β細胞分泌，並從胰島素原分裂而成的等克分子肽類物質。其在體內清除率慢，幾乎不被肝臟所攝取，且不受外源型胰島素影響。因此，外周血中濃度較高，較穩定，故能較準確的反應胰島β細胞的功能，用以指導臨床的診斷、治療及預後的評價。C肽測定方法多種多樣,包括酶聯免疫分析(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ,ELISA)、放射免疫分析(Radio Immunoassay，RIA)、電化學發光免疫分析(Electro Chemiluminescence Immunoassay，ECLIA)法等。本研究旨在對電化學發光免疫法測定C肽進行初步臨床評價,以探討ECL IA 的臨床套用價值。
1 材料與方法1.1 試劑與儀器
全自動電化學發光免疫分析儀為瑞士Roche公司的Elecsys 2010，C肽測定用配套試劑和配套定標品。酶聯免疫分析法的試劑盒為北京尚柏生物醫學技術有限公司產品，測量儀器為芬蘭的MK2型酶標儀。質控品為美國BIO-RAD公司的免疫分析質控品。
1.2 標本
80例標本采自確診的糖尿病病人,男48例,女32 例,年齡42歲～71歲,平均年齡57歲。病人均無肝腎等急慢性疾患,未用胰島素治療,口服降糖藥物治療者停藥3 d後採血。將血漿置於-20℃冰櫃待測。
1.3 方法
嚴格按試劑盒說明書操作,用配套試劑測定質控品,數值在標定值允許範圍內。按文獻[1,2]繼續做精密度測試,線性試驗,相關性試驗,回收試驗等評價試驗。
2.1 精密度試驗
取病人高、中、低3個濃度的標本,每個濃度分10 份檢測,計算批內誤差。結果ECLIA法所測批內平均變異係數(CV)=2.13 %, ELISA法所測批內平均CV=10.8 %;用高、中、低3個濃度標本3次獨立試驗測定,每次10 份,計算批間誤差。ECLIA法所測平均批間CV=4.27 %, ELISA法所測平均批間CV=16.5 %。
2.2 線性試驗
用通用稀釋液按1: 1、1: 2、1: 4、1: 8的比例稀釋高值質控血清,分別用ECL IA和ELISA法測定,將測定值連成直線, ECLIA法與標準曲線的線性關係好於ELISA法。
2.3 相關性試驗
分別用ECLIA 法和ELISA 法檢測, 標本C肽含量為(2.7±1.1)ng/ ml 和(2.9±1.8)ng/ml,結果進行相關分析。用SPSS 軟體包進行相關性分析, 結果相關係數r= 0.987回歸方程為YECLIA =1.13X ELISA－0.16, P <0.05，顯示兩種方法具有良好的相關性。
2.4 回收試驗
取病人低、中、高3組定值血漿,檢測3次回收率,回收率= (實測值－原血清值)/加入值×100 %,ECLIA法分別為98.4 %,101.0 %, 97.4 % ,平均98.9%。ELISA法分別為90.4 %,95.0 %, 90.2 % ,平均91.9 %。
2.5 靈敏度試驗
取定值質控血清分20份平行測定,計算均數和標準差,用均數減去2倍標準差值即為最小可測量, ECL IA法的值為0.01 ng/ml, ELISA法的值為0.06 ng/ml。
2.6 兩種方法所測C肽含量與胰島素的相關性
將所有標本同時用ECLIA法測胰島素含量為(12.5±10.4) mU/L,並與ECL IA和ELISA法測得C肽含量進行相關分析。ECL IA 法測得C肽與胰島素的相關係數是0.96,ELISA法測得C肽與胰島素的相關係數是0.89 ,兩相關係數的差別無統計學意義。
C肽是含31個胺基酸的多肽,它和胰島素的A、B鏈組成胰島素原,是A、B鏈的連線鏈,在胰島素原分子的摺疊、二硫鍵的正確配對中起重要作用。C肽與胰島素共同存在於同一顆粒囊內最終以等分子分泌。C肽不通過肝臟酶的代謝,而主要經過腎臟消除,其消除速率慢,半衰期為20 min。C肽最初被認為是無生物活性的,開始僅用於與胰島素結合起來判斷胰島β細胞功能,目前認為[3]C肽是一種具有多種生物學活性的肽類激素，是胰島β細胞分泌胰島素缺陷的重要病理生理基礎。由於C肽與胰島素結構不一樣,兩者無交叉免疫原性,對已使用胰島素或已產生胰島素抗體的糖尿病患者, C肽的測量對內源性胰島素的分泌能力評價更具有臨床意義。
電化學發光免疫分析屬於第4代化學發光免疫分析。於20世紀90年代問世,是一種新型的化學發光免疫分析。ECLIA 是集電子發光技術、納米微粒子技術、生物素-親和素系統、抗原-抗體免疫反應、電磁場分離整合為一體而設計的一種自動化標記免疫分析系統[4]。ECLIA是電化發光和免疫測定相結合的產物。它包括了電化學和化學發光兩個過程, 整個過程在一個全封閉的反應體系中進行, 全自動控制, 反應時間短,且靈敏度高。電化學發光免疫分析( ECL IA) 是用磁珠微球作為固相載體, 三聯吡啶釕[ Ru ( bpy) 3 ]2 +作為發光物質, 由電極激發,在三丙胺參與下循環反應,迅速穩定發光,使得檢測結果穩定可靠,精密度、準確度均優於酶聯免疫法。它既具有發光檢測的高度靈敏性, 又具有免疫分析的高度特異性,整個反應過程在一個全自動化的封閉體系中進行, 無人為操作誤差影響[5]。
本實驗結果證明：ECLIA法測定血漿C肽精密度較ELISA 法好,其原因一是試劑穩定,二是ECLIA法為全自動分析儀操作完成,從而避免了ELISA法複雜的人工操作所造成的誤差。ECLIA法所測C肽的線性和回收率亦均高於ELISA法，而且抗干擾能力強。此外，ECLIA和ELISA法所測的C肽含量均與胰島素含量呈正相關,且無統計學差異,說明兩種方法都能用於評價胰島β細胞功能, ECLIA法檢測範圍更寬, 標本可以隨到隨測, 20 min內出結果,而且可以同時檢測胰島素和C肽兩項指標，較ELISA法大大縮短了檢測時間,能充分滿足臨床需求。總之，電化學免疫發光法檢測C肽靈敏、快速、準確、穩定, 具有重要的臨床套用價值。
【參考文獻】
