質粒擴增

質粒擴增是大量獲取質粒的一種化學生物學方法,通常包括將細菌質粒轉化到大腸桿菌中,然後從大腸桿菌中收穫大量質粒的過程。 細菌鋪板:讓細菌在LB培養基上生長,培養基上為了防止雜菌生長,會加入抗生素,而含有目標質粒的細菌帶有抗生素的抗性,能夠正常生長,從而保證板子上長出來的會是目標菌落。 質粒轉化:將挑好的菌落放到大腸桿菌培養液當中,讓大腸桿菌細胞中感染這些細菌,經過這一過程的大腸桿菌細胞被稱為感受態細胞

質粒擴增

質粒擴增是大量獲取質粒的一種化學生物學方法,通常包括將細菌質粒轉化到大腸桿菌中,然後從大腸桿菌中收穫大量質粒的過程。

步驟:

細菌鋪板:讓細菌在LB培養基上生長,培養基上為了防止雜菌生長,會加入抗生素,而含有目標質粒的細菌帶有抗生素的抗性,能夠正常生長,從而保證板子上長出來的會是目標菌落。
挑選菌落:從LB培養基上挑選菌落備用
質粒轉化:將挑好的菌落放到大腸桿菌培養液當中,讓大腸桿菌細胞中感染這些細菌,經過這一過程的大腸桿菌細胞被稱為感受態細胞
裂解抽提:採用細胞裂解的方式,從大腸桿菌中把目標質粒提取出來

用途介紹:

這一實驗主要用於獲取較多的質粒,質粒擴增需要的源頭質粒量非常小,1微克的質粒都已經能夠滿足擴增的需要,這也使得質粒的使用和贈送變得非常容易。質粒的用途往往是用於轉染細胞,通過轉染的方式讓細胞表達質粒中攜帶的基因,從而研究該基因對應蛋白的性能。在基礎細胞生物學研究中起著非常重要的作用。

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