星活性

所謂星活性又稱Star活性 。是指由於反應條件不同而產生的切斷與原來認識序列不同的位點的現象,也就是說產生Star活性後,不但可以切斷特異性的識別位點,還可以切斷非特異性的位點。產生Star活性的結果是酶切條帶增多。

所謂星活性又稱Star活性 。是指由於反應條件不同而產生的切斷與原來認識序列不同的位點的現象,也就是說產生Star活性後,不但可以切斷特異性的識別位點,還可以切斷非特異性的位點。產生Star活性的結果是酶切條帶增多。

所以說Star活性與粘端變平端沒關係。另外,Star活性除了與酶本身的性質有關外,與甘油濃度,pH值及離子濃度有關。

一般正規廠家生產的限制酶出廠前都做相關的檢測,buffer體系也都做了相應的考慮。因此正常情況下酶切,可以先不必考慮Star活性的問題。

一旦出現底物DNA不好切斷,需要增加酶量或延長反應時間時,如果使用的是易產生StaR活性的限制酶切,一般優先考慮增加酶量,而不是延長反應時間,換句話說,延長時間比增加酶量更易產生Star活性。

另外,實際上幾乎所有的限制性內切酶都可能產生Star活性。但目前Star活性對實際實驗室操作過程中的影響並不太大,可以先不考慮。

星活性是特異性的限制性內切酶介導的DNA裂解,可以從這些酶的最適顯著不同的反應條件下發生的鬆弛或改動的。其結果通常是在非規範的識別位點裂解,或有時完全喪失的特異性。

這可能會導致星活性的差異包括低離子強度,pH值高,和高(> 5%體積/體積)甘油的濃度。[ 1 ]的是後者的條件的特定的實際利益,因為商業的限制性內切酶在一個緩衝器中,通常提供含有大量的甘油(50%v / v是典型的),也就是說稀釋的酶溶液不足可導致星活性;此問題最經常出現在雙重或多重消化

相關詞條

熱門詞條

聯絡我們