寡核苷酸晶片

寡核苷酸晶片 寡核苷酸晶片的主要原理與cDNA晶片類似,主要通過鹼基互補配對原則進行雜交,來檢測對應片段是否存在、存在量的多少。

寡核苷酸晶片 寡核苷酸晶片的主要原理與cDNA晶片類似,主要通過鹼基互補配對原則進行雜交,來檢測對應片段是否存在、存在量的多少。它與cDNA晶片的本質差別在於寡聚核苷酸晶片固定的探針為特定的DNA寡聚核苷酸片段(探針),而後者為cDNA。基因表達晶片的兩個重要參數是檢測的靈敏度和特異性。cDNA晶片由於基因長短不同以至Tm值各異,眾多的基因在同一張晶片上雜交,使得雜交條件很難同一,使得傳統的cDNA晶片的分辨能力受到限制。寡聚核苷酸晶片序列選擇經過最佳化,利用合成的一定長度(如20,30,70-mer等)的寡核苷酸單鏈探針代替全長cDNA點樣,製成晶片。其優點:無需擴增,防止擴增失敗影響實驗;減少非特異雜交,能有效區分有同源序列的基因;雜交溫度均一,提高雜交效率;減少二級結構。此外,寡核苷酸晶片還可以通過原位合成法製備,而cDNA晶片只能通過後者製備。上述特點使得寡核苷酸晶片的套用日益廣泛。但是當寡核苷酸序列較短時,單一的序列不足以代表整個基因,需要用多段序列。
高密度的寡核苷酸晶片作為一個有力的工具廣泛用於分析基因組數據,與傳統的凝膠分析方法比較起來,具有成本低、高通量、高度自動化的優點,這些寡核苷酸晶片,已廣泛用於用遺傳變異掃描、分子條編碼、基因表達檢測及測序。寡核苷酸晶片主要用途包括:
1)臨床診斷方面。用於研究人類多基因相關性疾病(如癌症、心血管疾病等),發現相關的基因及其相互作用機理,尋找早期發現,早期診斷的方法;同時還可製成外源性病原體相關基因晶片,如病毒性肝炎晶片等;
2)基因功能研究。套用基因晶片可以開展DNA測序、基因表達檢測、基因突變性、基因功能研究、尋找新基因、單核苷酸多態性(SNP)測定等研究;
3)藥物篩選和新藥開發。採用了基因晶片技術來尋找藥物靶標,查檢藥物的毒性或副作用,用晶片作大規模的篩選研究可以省略大量的動物試驗,縮短藥物篩選所用時間,在基因組藥學(pharmacogenomics)領域帶動新藥的研究和開發;並可指導實現合理用藥。
4)環境監測和指導高科技農業等。監測流行病和傳染病擴散;監測有害微生物的發生和傳播;農、林、牧、漁等產業的品種改良和病蟲防治。
5)其它。如DNA身份認定等。

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