粗多糖

粗多糖

粗多糖:是從大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的總稱,大豆中的寡糖屬於а-半乳糖苷類,包括棉籽糖、水蘇糖和Vabascose。雙歧桿菌能發酵粗多糖產生短鏈脂肪酸和一些抗菌素物質,從而可抑制外源致病菌和腸內固有腐敗細菌的生長繁殖。準確稱取100mg乾燥後的葡聚糖,用水定容至100ml,葡聚糖標準濃度為1.0mg/ml。從 標準曲線上查得樣品相應含量,計算粗多糖含量。

簡介

粗多糖:是從大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的總稱,大豆中的寡糖屬於а-半乳糖苷類,包括棉籽糖、水蘇糖和Vabascose.

(1)、促進雙歧桿菌的增殖:人體雖然不能直接利用粗多

粗多糖粗多糖
糖,但是粗多糖可被腸內細菌利用,並且能促進雙歧桿菌的增殖。雙歧桿菌是一種厭氧革蘭氏陽性細菌,是維護和保持腸道菌群平衡的一個極為重要的因素,也是判斷腸內外環境是否正常的一個可靠依據。

(2)、抑制病原菌:大豆粗多糖能促進雙歧桿菌的增殖,從而抑制有害細菌如產生 莢膜梭狀芽孢桿菌的生長。雙歧桿菌能發酵粗多糖產生短鏈脂肪酸和一些抗菌素物質,從而可抑制外源致病菌和腸內固有腐敗細菌的生長繁殖。

(3)、防止便秘、腹脹,促進消化,調節胃腸功能:腸道內的雙歧桿菌發酵粗多糖產生大量的短鏈脂肪酸(主要是醋酸和乳酸),能刺激腸道蠕動,從而促進消化,防止便秘的產生。

(4)、增強免疫功能:如果人較長期的食用無細菌食物,腸道就會因為缺少刺激而使其產生抗體的能力下降,從而容易誘發疾病。食用粗多糖,促進雙歧桿菌的增殖,將對腸道免疫細胞產生刺激,提高其產生抗體的能力從而起到防治疾病的效果。

粗多糖的測定方法

1. 原理

分子量大於10,000道爾頓的多糖經80%乙醇沉澱後,加入鹼性 銅試劑,選擇性地從其他 高分子物質中沉澱出 葡聚糖,沉澱部分與 苯酚-H2SO4反應,生成有色物質,在485nm條件下,有色物質的 吸光度值與葡聚糖濃度成正比。

2. 適用範圍

參照AOAC方法。適用於檢測含有分子量大於10,000道爾頓葡聚糖的樣品。

3.儀器

(1) 分光光度計

(2) 離心機

(3) 旋轉混勻器

(4) 恆溫水浴鍋

4.試劑

除特殊說明外,實驗用水為蒸餾水,試劑為分析純。

(1) 80%乙醇:800ml無水乙醇加水200ml。

(2) 2.5 mol/L NaOH溶液:100 g NaOH加 蒸餾水稀釋至1 L,加入固體 無水硫酸鈉至飽和。

(3) 銅貯存液:稱取3.0 g CuSO4 ·5H2O,30.0 g檸檬酸鈉加水溶解至1 L。溶液可貯存2周。

(4) 銅套用溶液:取銅貯存液50 ml,加水50 ml混勻後加入 無水硫酸鈉12.5 g,臨用新配。

(5) 洗滌液:取水50 ml,加入10 ml銅套用溶液,10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液,混勻。

(6) 1.8 mol/L H2SO4:取100ml濃硫酸用水稀釋至1L。

(7) 20 g/L苯酚溶液:稱取2.0g苯酚,加水溶解並稀釋至100ml,混勻備用。

(8) 葡聚糖標準液:稱取500mg葡聚糖(分子量500,000D)於稱量皿中,105℃乾燥4h至恆重,置於裝有乾燥矽膠的乾燥器中冷卻。準確稱取100mg乾燥後的葡聚糖,用水定容至100ml,葡聚糖標準濃度為1.0mg/ml。

(9) 葡聚糖標準套用液:吸取葡聚糖標準液10ml,用水稀釋10倍,葡聚糖終濃度為0.1mg/ml。

5. 操作方法

5.1 樣品處理

(1) 樣品提取:稱取樣品1~5g,加水100ml,沸水浴加熱2h,冷卻至室溫,定容至200ml(V1),混勻後過濾,棄初 濾液,收集餘下濾液。

(2) 沉澱高分子物質:準確吸取上述濾液100ml(V2),置於燒杯中,加熱濃縮至10ml,冷卻後,加入無水乙醇40ml,將溶液轉至 離心管中以3000rpm離心5min,棄上清液,殘渣用80%乙醇洗滌3次,殘渣供沉澱葡聚糖之用。

(3) 沉澱葡聚糖:上述殘渣用水溶解,並定容至50ml (V3),混勻後過濾,棄初始 濾液後,取濾液2.0ml(V4),加入2.5mol/L NaOH2.0ml,Cu套用溶液2.0ml,沸水浴中煮沸2mim,冷卻後以3000rpm離心5min,棄上清液,殘渣用洗滌液洗滌3次,殘渣供測定葡聚糖之用。

(4) 測定葡聚糖:上述殘渣用2.0mL 1.8mol/LH2SO4溶解,用水定容至100mL(V5)。準確吸取2.0ml(V6),置於25ml比色管中,加入1.0ml苯酚溶液,10ml濃硫酸,沸水浴煮沸2分鐘,冷卻比色。從 標準曲線上查得相應含量,計算粗多糖含量。

5.2 標準曲線製備:

精密吸取葡聚糖標準套用液0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.50,2.00ml(分別相當於葡聚糖0.01,0.02,0.04,0.06,0.08,0.10,0.15,0.20mg),補充水至2.0mL,加入苯酚溶液1.0ml,濃硫酸10ml,混勻,沸水浴2分鐘,混勻,沸水浴2分鐘,冷卻後用分光光度計在485nm 波長處以 試劑空白溶液為參比,測定 吸光度值(A),以葡聚糖濃度為橫坐標,A為縱坐標繪製 標準曲線。

6.計算

從 標準曲線上查得樣品相應含量,計算粗多糖含量。

葡聚糖( % ) = c× V5×V3×V1×0.1 = c× 250 ………………………(1 ) V6×V4×V2×m m

公式中:c--從標準曲線上查得樣品測定管中葡聚糖含量,mg;

V1--樣品提取時定容體積,ml;

V2--沉澱高分子物質取液量,ml;

V3 --沉澱 葡聚糖時定容量,ml;

V4 --沉澱葡聚糖時取液量,ml;

V5 --測定葡聚糖時定容體積,ml;

V6 --樣品比色管中取樣液體積,ml;

m--樣品稱量質量,g;

0.1--將mg/g 換算成g/100g 的係數。

7.注意事項

(1) 苯酚-H2SO4溶液可以和多種 糖類進行 顯色反應,常用於 總糖的測定。所以測定過程中應注意容器及試劑中其他糖類的干擾。

(2) 苯酚-H2SO4溶液和不同類的糖反應,顯色的強度略有不同,反映在 標準曲線的斜率不同。如果已知樣品中糖的結構,應儘量以同類糖的純品做標準品,或以含有已知濃度的同類產品做對照品進行檢測分析;如果樣品中糖的類型未知或結構多樣,則只能以 葡萄糖計或其他糖計報告結果。

(3) 試驗證明葡萄糖、果糖等單糖,蔗糖、乳糖等雙糖、低聚糖-- 棉子糖,澱粉、糊精等多糖及甜味劑糖精不干擾粗多糖測定。

(4) 本方法由北京市衛生防疫站建立,經中國預防醫學科學院營養與食品衛生研究所驗證。

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