生物素標記核酸探針技術

這是一種非放射性標記技術。主要利用了生物素(biotin)和親和素(avidin)這兩種分子的獨特性質。

親和素是一種鹼性的四聚體糖蛋白，其分子量為68000，Pll0.5。每個亞基都能結合一個生物素分子。生物素與親和素的結合具有專一、迅速和穩定(走〔;=10’‘5)的特點，並且這些結合只需要生物素的脈基環部分。因此可將其戊酸側鏈通過酞胺鍵與核酸分子相連，構成生物素標記的核酸探針、標記探針與固定在濾膜(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上或固定在組織細胞或染色體原位的核酸分子的同源序列互補雜交、探針和待測核酸在雜交前若為雙鏈，應先變性成單鏈，然後用偶聯有酶或螢光物質的親和素的探針與待測核酸中的片段互補雜交，使雜交部位顯色(加人相應的酶底物)或產生螢光。靈敏度可達」一10pg水平，與放射性探針法相近、·如果進一步改進，甚至可超過後者