放射性自顯影法

①接觸法,最簡單的一種,一般利用照相膠片或X光膠片,使含有放射性物質的標本表面與膠片上的乳膠層表面緊密接觸,經過一定時間“曝光”後,將標本與膠片分開,膠片經過顯影、定影等處理後即可得到自顯影圖像。 此法的解析度受膠片上乳膠層的厚度及顆粒大小的限制,一般為10~30微米,適用於小的動、植物整體標本,大體解剖學的和組織學的切片以及薄層、紙層和電泳圖譜的自顯影等; 此法的解析度可達0.05~0.1微米,能分辨DNA分子的一條鏈,故又稱為“分子自顯影法”。

放射性自顯影法與普通照相的曝光、顯影、定影原理相似,此法是利用放射性同位素所放出之射線使照相乳膠“感光”,再經顯影和定影處理,將乳膠中因受輻照而致敏的鹵化銀顆粒還原成金屬銀,洗去未“感光”的鹵化銀後則圖像自然顯示出來。圖像中任何區域的黑度取決於留存的金屬銀的量,它反映了射線在這個區域所沉積的能量。這種方法以照相乳膠或核乳膠(鹵化銀顆粒更細)作為“儀器”,記錄、檢查和測量整體和組織、細胞和亞細胞水平中放射性示蹤物的分布、進行定性和半定量測定,稱為放射自顯影法。
由於放射性物質往往在研究對象中呈不均勻分布,因此可利用一系列不同的圖像判斷放射性物質在組織或細胞中的動態關係,從而揭示精確的代謝動態過程,所以這種實驗技術以其特有的功效從放射性被發現至今仍一直被廣泛使用。
目前常用的自顯影方法有以下幾種類型:
接觸法,最簡單的一種,一般利用照相膠片或X光膠片,使含有放射性物質的標本表面與膠片上的乳膠層表面緊密接觸,經過一定時間“曝光”後,將標本與膠片分開,膠片經過顯影、定影等處理後即可得到自顯影圖像。此法的解析度受膠片上乳膠層的厚度及顆粒大小的限制,一般為10~30微米,適用於小的動、植物整體標本,大體解剖學的和組織學的切片以及薄層、紙層和電泳圖譜的自顯影等;
②液體乳膠法,目前套用較廣泛的一種。一般是將液體乳膠直接塗布到載玻片的組織切片上,“曝光”後連同標本一起進行顯影、定影、沖洗和染色,並最後封固在一起。此法的解析度可達1~10微米,可進行細胞內定位;
③電鏡自顯影法,是放射自顯影與電子顯微鏡相結合的一種新技術。需使用顆粒均勻、大小適中、密度一般為1013銀顆粒/厘米3的核乳膠。含有標記物質的樣品需製成超薄切片,切片可以撈在帶支持膜的銅網上或載玻片上。採用浸塗法、環套法或泡蓋法等使乳膠形成一單晶體層敷蓋在切片上,再經“曝光”、沖洗和染色等處理。此法的解析度可達0.05~0.1微米,能分辨DNA分子的一條鏈,故又稱為“分子自顯影法”。

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