Wazard大量DNA純化系統
鹼法大量提取DNA往往需要很長的時間.Promega公司的Wiazrd大量DNA純化系統既簡單又快速,只需要離心和真空抽乾,這個系統可以從500ml培養液中在3小時以內獲得1mg以上的高質量的質粒DNA(200-20000bp)。該系統不需要酚和氯仿抽提,純化後的DNA溶於水或TE緩衝液中，不含任何鹽份，可以直接用於DNA序列分析和酶切反應，也可以用於在核酸酶抑制劑（如RNasin）存在的條件下進行體外轉錄反應等。
該系統中含有的試劑和柱子可以用於10次100-500ml質粒培養液的分離和純化,試劑包括: 150ml 細胞懸浮液，150ml 細胞裂解液，150ml 中和液，100ml Wizard 大量DNA純化樹脂，125ml Wizard柱子洗脫溶液和10支 Wizard帶有存儲離心管的柱子。
方法
1、100-500ml細胞培養液置離心管中, 22-25℃下5000g離心10分鐘, 所得細胞沉澱充分懸浮於細胞懸浮液中。
2、 加15ml細胞裂解溶液並輕輕混合,可以反覆倒置混合,但不能用渦旋振盪,細胞裂解完全時,溶液會變清,這一步需要20分鐘。
3、 加15ml中和溶液,立即反覆倒置離心管數次，並使之混勻。
4、 14000g,22-25℃離心15分鐘。
5、 小心地將上清液吸出並移至一個新離心管中。
6、 加0.5倍體積的異丙醇,混合均勻, 14000g 22-25℃下離心15分鐘。
7、 棄上清,懸浮DNA沉澱於2ml TE緩衝液中。這一步中也許有的沉澱不能溶解。
8、 加10ml Wizard大量DNA純化樹脂溶液, 並渦旋混合。
9、每一個樣品,使用一支Wizard大量柱子,柱子的頭插在真空器上(Promega產品,與此配套)。
10、將樹脂/DNA混合液轉入柱子中,真空抽取樹脂/DNA混合液。
11、將樹脂/DNA混合液抽乾後,加13ml柱子洗脫溶液至離心管中, 對管底部的樹脂/DNA進行洗脫(柱子一邊旋轉一邊加入洗脫液)，並加入柱子中。
12、真空抽乾所加入的洗脫。
13、 再加12ml柱子洗脫液進柱子並抽乾。
14、 加入5ml 80％乙醇漂洗柱中的樹脂, 柱子真空抽乾後將柱子放入用戶提供的離心管中,2500rpm(1300g)離心5分鐘。
15、 取出柱子，真空抽乾5分鐘,再將柱子放入系統中所提供的離心管中，2500rpm(1300g)離心5分鐘。
16、在柱子中加入1.5ml 65-70℃預熱過的滅菌重蒸水或TE,1分鐘後2500rpm(1300g)離心柱子/離心管5分鐘。
17、 取出柱子,離心管中溶液即為提取的質粒DNA,可以直接放在離心管中,蓋上蓋子，儲存在4℃或-20℃備用。
【注意】
1. 在使用之前,系統所提供的柱子洗脫液按1:1加入125ml 95％乙醇。
2. 純化樹脂必須混勻後再用.
