蛋白酶抑制

破碎細胞提取蛋白質的同時可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質不被降解。在蛋白質提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點，因為各種蛋白酶對不同蛋白質的敏感性各不相同，因此需要調整各種蛋白酶的濃度。由於蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應注意在緩衝液中加人蛋白酶抑制劑時應充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉澱。在寶靈曼公司的目錄上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表。

蛋白酶抑制劑

PMSF
1)抑制絲氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);
2)10mg/ml溶於異丙醇中;
3)在室溫下可保存一年;
4)工作濃度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);
5)在水液體溶液中不穩定，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF。
EDTA
1)抑制金屬蛋白水解酶;
2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;
3)溶液在4℃穩定六個月以上;
4)工作濃度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);
5)加入NaOH調節溶液的pH值，否則EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制劑(pepstantin)
l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶;
2)1mg/ml溶於甲醇中;
3}儲存液在4℃一周內穩定，-20℃穩定6個月;
4)1作濃度:0.7ug/ml(1umol/L)
5)在水中不溶解。
亮抑蛋白酶肽(leupeptin)
1)抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組織蛋白酶B;
2)lOmg/ml溶於水;
3)儲存液4℃穩定一周，-20℃穩定6個月;
4)工作濃度0.5mg/ml。
胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)
1)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;
2)lOmg/ml溶於水，pH7~8
3}儲存液4℃穩定一周，-20℃穩定6個月;
4)工作濃度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);
5)避免反覆凍融:
6)在pH>12.8時失活。
蛋白酶抑制劑混合使用
35ug/ml PMSF………………………絲氨酸蛋白酶抑制劑
0.3mg/ml EDTA……………………金屬蛋白酶抑制劑
0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制劑
0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)…………廣譜蛋白酶抑制劑