熱啟動PCR

熱啟動PCR(hot start PCR) 是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品溫度至少超過70C時才發揮作用的PCR，可提高反應的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適官溫度低得多的條件下仍有較強的活性。PCR 反應的最初加熱過程中，樣品溫度上升到70C之前，在較低的溫長度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結合，並在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結果會導致非靶序列的擴增，影響反應的特異性。熱啟動可減少非靶序列的擴增，提高反應的特異性。在引物設計時如果某位點因為遺傳元件的定位而受限，如site-directed 突變、表達克隆或用於DNA 工程的遺傳元件的構建和操作等情況，熱啟動PCR 尤為有效。 其基本方法是: 進行反應之前，將Taq DNA 聚合酶、dNTP 和引物等先不要加人樣品管內，而是將樣品加熱，待溫度升到70C 以上時，再將上述試劑加人，開始PCR反應。

熱啟動通過抑制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR 儀達到變性溫度。延緩加人Taq DNA 聚合酶的手工熱啟動方法十分煩瑣，尤其是對高通量套用。其他熱啟動方法使用蠟防護層將一種基本成分(鎂離子、酶、模板、緩衝液等) 隔離開。在熱循環時，蠟熔化把各種成分釋放出來並混在一起。蠟防護層法同樣比較煩瑣，易於污染，不適用於高通量套用。