核酸雜交技術

DNA印跡雜交（Southern blot）RNA印跡雜交(Northern 1、DNA印跡雜交（DNA

定義

核酸分子雜交技術

核酸雜交技術是一種分子生物學的標準技術，用於檢測DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。DNA或RNA先轉移並固定到硝酸纖維素或尼農膜上，與其互補的單鏈DNA或RNA探針用放射性或非放射性標記。在膜上雜交時，探針通過氫鍵與其互補的靶序列結合，洗去未結合的游離探針後，經放射自顯影或顯色反應檢測特異結合的探針。

印跡雜交

DNA印跡雜交（Southern blot）RNA印跡雜交(Northern blot)
1、DNA印跡雜交（DNA blot hybridization）有兩種核酸印跡法：
·將DNA或RNA溶液直接點樣於硝酸纖維素膜或尼農膜上（斑點或狹線印跡）
·經瓊脂糖凝膠電泳將片段的DNA或RNA轉移到膜上（Southern和Northern印跡法）。DNA在電泳前先用限制性內切酶消化。
2、RNA印跡雜交（RNA blot hybridization）：
·RNA印跡雜交是一種檢測已固定在濾膜上的總RNA或mRNA特定靶序列的技術。
（一）斑點雜交
將少量核酸樣品點樣在硝酸纖維素濾膜上，80℃烘烤後可牢固地固定在膜上，再用探針進行雜交。尼龍膜，特別是聚偏氟乙烯（PVDF）與DNA結合力更高，堅韌、易操作。點樣可手工，也可用手工點樣品。檢測可用放射性探針自顯影或非放射性探針顯色。可用於DNA或RNA分析。
（二）原位雜交
在保持細胞形態條件下，進行細胞內雜交，顯影或顯色。可用於DNA或RNA分析。螢光原位雜交（FISH）進行染色體DNA分析可用於生物學研究的許多領域以及臨床細胞遺傳學研究。其主要優點是不僅可以在細胞分裂的中期，而且可在分裂間期核中診斷染色體的變化。