擬南芥轉基因

擬南芥轉基因

"2)LB培養基中添加50mg/L的卡那黴素(kan 4)擬南芥轉基因浸潤液採用的是1/2MS,加蔗糖50g/L, 2.PCR

物種介紹

擬南芥是一種模式植物,多年來圍繞擬南芥的相關研究很多,尤其是對於擬南芥轉基因研究非常熱門,相關的論文也有很多。原因主要有以下幾個方面:

擬南芥轉基因 擬南芥轉基因

1 擬南芥是一種模式植物,基因組小,克隆其基因比較簡單。 2 種植方便,條件易得。

3 擬南芥是自花傳粉植物,這樣既很容易進行遺傳分析。

4 方法簡單,不同於傳統的植物轉基因,不需要植物組織培養階段,對於實驗操作的要求不是很高。

當前擬南芥轉基因所使用的方法主要是農桿菌介導的轉化(載體法),區別主要是轉化的方法不同,有抽真空,花序浸染和噴霧法使用最為廣泛。

基本流程

農桿菌(目標載體)液的製備↘

擬南芥種植→花期(侵染)→共培養→收種→驗證

農桿菌製備

1)從-80℃冰櫃中取出lml農桿菌。

2)LB培養基中添加50mg/L的卡那黴素(Kan)和100mg/L的利福平(Rif)。

3)把lml農桿菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培養基中,28℃振盪10h。

4)擬南芥轉基因浸潤液採用的是1/2MS,加蔗糖50g/L, PH值調至5.7。然後在15p壓力下蒸汽滅菌15min,滅菌結束,冷卻後保存於4℃,以待轉基因使用。

轉化

抽真空/花序浸染/噴霧法

其中抽真空法轉化效率最高,但是步驟麻煩,而且要將擬南芥倒置浸染到菌液中,操作不方便。噴霧法相比來說簡便易行,而且進行重複浸染,可以提高轉化效率。

驗證

1.種子篩選,將收到的種子種植於含有篩選劑(卡那黴素/潮黴素等)的培養基上,篩選出抗性幼苗。

2.PCR,提取擬南芥基因組,進行PCR擴增,核酸電泳觀察有無目的基因。

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