簡介
單光子檢測 是近十年來在國內外最流行的檢測技術,其靈敏度、準確性均要高於酶聯免疫分析技術,適用於實驗室,具有一定的標本數量與日常測試的需求的單位。
特點
海爾曼首先將單光子套用於免疫分析 的創建,發展至今已經成為一種成熟的、先進的超微量活性物質檢測技術,是醫學和生物學領域中重要的檢測手段之一,套用範圍非常廣泛。它主要優點有:
(1)高靈敏度:由於不需要外來光源,避免了瑞利散射 和拉曼散射 等干擾,因而具有比螢光法更高的信噪比,其靈敏度比RIA或EIISA高100~1000倍,可達10-16mol/L。如單光子底物可檢測出的鹼性磷酸酶 的濃度比顯色底物要靈敏50萬倍。即使在不需要高靈敏度的指標下,由於技術有了冗餘量,使得操作與反應時間進一步縮短。
(2)檢測範圍寬;單光子具備寬的線性動力學範圍,強度在4~6個量級之間與測定物質濃度間呈線性關係,因而理論上可以檢測濃度範圍為1~10000倍。相對而言,酶聯免疫 分析吸光度(OD值)為0.05~2.0,一般檢測範圍只有1~40倍,優勢明顯。在實際使用中,實驗員就減少了因為標本濃度過高而需要反覆稀釋標本與重複實驗的工作量。
(3)誤差與變異小。顯色反應通過透射來檢測,受溶液的均一性影響,檢測變異在4%左右。而採用單光子檢測的方式,基本沒有檢測變異。因而單光子分析檢測的誤差與變異較小,或稱為重複性好、精密性好。
(4)安全性好。早期的放射免疫 有放射性危害,需要專門的實驗室。酶聯免疫 的OPD、TMB等顯色底物均被認為是致癌物,而實驗中使用的高濃度硫酸對人體及環境都有較大的影響,需要小心操作。單光子分析檢測則沒有這方面的問題。
(5)各種分析檢測技術均有其優缺點,對比如下:
表一:分析技術比較(酶聯免疫、膠體金 、單光子)
| 酶聯免疫 | 膠體金快檢卡 | 單光子 | |
| 操作時間 | 0.5-2小時,再加顯色10分鐘 | 極短,5-10分鐘左右 | 0.5小時 |
| 危害 | 底物致癌,濃酸污染 | 無 | 無 |
| 誤差及變異 | 10%-20% | 15%-30% | 2%-5% |
| 靈敏度 | 中 | 低 | 高 |
| 有效期 | 1年 | 1-2年 | 1年 |
| 定量/定性 | 定量 | 定性 | 定量 |
| 成本 | 低 | 低,無儀器成本 | 低 |
| 技術成熟性 | 成熟 | 部分缺憾 | 成熟 |
| 干擾性 | 孔壁透光性 顯色底物溶解性 | 污漬,不均一性 | 孔間光子泄露 |
