| 美津子：（CV: 平野綾 ） 美甘千津子 ，簡稱千子。生於大資本家美甘家，由於父母雙亡而由叔父叔母養育。但叔母一直算計著讓美津子死去而得到她的遺產，讓美津子不停地攝入放了毒藥的食物。拯救了在家庭內被孤立心裡痛苦的美津子的，是世間知名的怪人二十面相。十一歲的美津子與二十面相一起游向自由與冒險的大海。被二十面相當做繼承人來培養，被稱為‘二十面相的女兒’自己也是這么認為的 |  美甘千津子 |
| 二十面相（千子叫“叔叔”，健叫boss)：是一位被稱為：“只要人們一見面，就一定會以他為話題” 的超有名的怪盜。但是誰都不知道他真正的長相及名字。他只對真正美麗的東西感興趣，於是被美津子美麗的心靈所吸引的二十面相，從滿心計算並欺騙美津子的叔叔嬸嬸那裡將她搶奪了過去。其實他還另有意圖，似乎還有些自己的什麼目的……是大戰中大型破壞性武器的研究員，一個天才。後認識到戰爭的殘酷性，計畫銷毀一切研究數據。故事即圍繞這展開。個人魅力十分強大啊！！！ |  |
| 健 又名肯,二十面相的夥伴，十五歲的少年。一直很崇拜二十面相。對於新加入的美津子，他就像是個哥哥一樣。在美津子來之前，他是二十面相的夥伴中年紀最小的，擔任著活躍氣氛的角色。得意武器是小刀。長大後走上與千子不同的道路，但彼此還是朋友，並在黑暗中守護著千子···（健本身就很不坦率的啊！！！看得出他是喜歡千子的說···） |  |
| 虎 二十面相眾多對其盜竊品窺視者之一，亦是通緝犯。把健的眼睛抓傷（健最終獨眼），策劃了襲擊船長一行人的行動，致使大夥僅剩健與千子倖存，更使千子與二十面相失去聯繫、又回到了曾經那個惡毒的女人身邊。虎在完成這一切後死於受傷與火車爆炸。 （更多人物詳見《二十面相少女》動畫） |
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| 船長 在二十面相的夥伴中，他的存在可以說是相當有份量的一個人物。嘴很壞，但對於健和美津子這樣的小孩子卻很溫柔地照顧他們。後來在大夥遭受虎的惡性侵襲時身受數搶，選擇抱著敵人跳下火車（為敬愛的船長默哀） |  |
| 留(CV： 新井里美 ）) 千津子阿姨家的女傭,於第七集出現,在千津子與二十面相失去聯繫期間照顧千津子.（畫風類似 BLOOD+ 的主角 音無小夜 ） |  |
