提取方法
纖維素DE-52提取法純化多克隆抗體
該法提取IgG簡便，既可小量提取，也可大量製備。
1．批量提取法 稱取DEAE-纖維素(DE52)50g，置於1000ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細顆粒，再經酸鹼處理後，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩衝液(PB)平衡。將水分抽乾，或用布氏濾斗(內放兩層濾紙)過濾，收集濕纖維素，以降低其離子強度。按1ml血清加濕重5g DE52，經過充分攪拌，置4℃吸附1h。上清液可再如此處理一次，即獲得較純的IgG。該法提取IgG簡便，既可小量提取，也可大量製備。
2．Tris-Cl離子交換層析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和試劑】
（1）DE52纖維素。
（2）HCl；NaOH；0.01～0.05mol/L，pH8.0 PB；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5mol/L NaCl。
（3）待純化標本：雜交瘤腹水或培養上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
（4）1.5×50cm 層析柱；透析袋；紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材。
【操作步驟】
（1）DE52纖維素的處理：DE52經酸、鹼處理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。
（2）裝柱：將層析柱固定於滴定架上，柱底墊一圓形尼龍紗，出口接一細塑膠管並關閉出水。將浸泡於0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高時，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或鬆開出水口螺鏇夾，控制流速1～2ml/min，同時連續加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降後，柱面放一圓形濾紙片。
（3）平衡：鬆開出水口螺鏇夾，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速為15滴/min，待流出液與洗脫液之pH值達到一致時，停止平衡。
（4）待提取樣品的準備：將蛋白裝入透析袋裡，置4℃冰櫃，對0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析過夜。
（5）加樣、洗脫與收集：用吸管吸去柱面液體，以毛細吸管沿柱壁加入樣品，樣品體積相當於柱床體積的1%～2%，蛋白濃度為50～70mg。啟開出水口螺鏇夾使樣品緩慢進入柱床內，並用少量洗脫液清洗柱壁；待液體進入柱床後，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脫，控制流速為14～16滴/min。分部收集器收集，紫外監測，或人工收集，以紫外分光光度計分別測定每管280nm OD值，描繪洗脫液峰。
（6）濃縮：將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合併，裝入透析袋，以PEG濃縮至所需體積。
Tris-PO4離子交換層析法
該法在上述方法的基礎上稍加改良，即通過梯度洗脫，可用於血清中IgG和IgM的提取。
【材料和試劑】
（1）DE52纖維素。
（2）待純化標本：雜交瘤腹水或培養上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
（3）1.5×50cm 層析柱；透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材。
（4）梯度洗脫液包括：0.005 mol/L，pH8.6 Tris-PO4；0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4；.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4。
【操作步驟】
（1）蛋白標本對0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4透析。
（2）DE52裝柱，並以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4平衡。
（3）加樣，以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4洗脫，紫外監測直至洗脫液280nm OD回到基線。這一步驟可除去血清中其他蛋白。
（4）以350ml 0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4洗脫，這一步驟可用於純化血清IgG和IgM。
（5）以125ml 0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4梯度洗脫，總量收集250ml；重複步驟（5）。
（6）根據280nm峰值合併蛋白峰，透析濃縮和保存同上。
用過的DE52可用0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl梯度洗脫回收。再用蒸餾水洗至中性，加入0.02%疊氮鈉於4℃保存備用。
性質用途
性狀：乾燥細結晶或纖維狀
基質 高度交聯纖維素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附載量 180mg HSA/ml
填料的顆粒大小 50μm
最大流速 300cm/h
pH範圍 3-10，在位清洗時pH範圍可到2-11
化學穩定性 各種緩衝液及鹽，0.5M NaOH及醋酸，8M脲，6M鹽酸胍，乙醇，異丙醇等
物理穩定性 0.1M中性緩衝液中，120℃30min
