基本簡介
紫外可見分光光度計簡介 1852年，比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液層厚度相等時，顏色的強度與呈色溶液的濃度成比例，從而奠定了分光光度法的理論基礎，這就是著名的比爾朗伯定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論套用於定量分析化學領域，並且設計了第一台比色計。到1918年，美國國家標準局製成了第一台紫外可見分光光度計。此後，紫外可見分光光度計經不斷改進，又出現自動記錄、自動列印、數字顯示、微機控制等各種類型的儀器，使光度法的靈敏度和準確度也不斷 提高，其套用範圍也不斷擴大。
紫外可見分光光度計 從儀器理論上講，各種紫外可見分光光度計，都是根據比耳定律設計的；而比耳定律研究的是在平行光、單色光的條件下，物質對光的吸收。但是，紫外可見分光光度計的單色器不可能得到真正的單色光。並且，單色器系統不同，它產生的單色光的純度（光譜頻寬）也不同，並且光通過物質時，也不可能是真正的平行光。因此，嚴格地說，實際工作中，任何紫外可見分光光度計，都不可能真正滿足比耳定律。所以，紫外可見分光光度計都是針對近似平行光、近似單色光的條件設計的。所以，就看誰設計、製造儀器最能滿足或接近比耳定律（或產生的比耳定律的偏離最小），誰的儀器到了使用者手裡，由於非平行光或非單色光產生的分析誤差最小，誰的儀器就最好（當然還有雜散光、噪聲、穩定性等要求）。這就是從儀器學理論，去看紫外可見分光光度計的設計、製造誤差的最根本、最本質的問題；也是使用者從儀器學理論去看紫外可見分光光度計的分析誤差的最根本、最本質的問題。
工作原理
吸收光譜
物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量， 相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由於各種物質具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其 特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據吸收光譜上的某些特徵波長處的吸光度的高低判別或 測 定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據物質的吸 收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。朗伯比爾定律
紫外可見分光光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。朗伯定律是說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比；如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。波長範圍
紫外可見分光光度計是基於物質分子對200nm-700nm區域內光輻射的吸收而建立起來的分析方法。由於200-780nm光輻射的能量主要與物質中原子的價電子的能級躍遷相適應，可以導致這些電子的躍遷，所以紫外可見分光光度計又成為電子光譜計。主要套用
3.1 檢定物質根據吸收光譜圖上的一些特徵吸收，特別是最大吸收波長雖ax和摩爾吸收係數是檢定物質的常用物理參數。這在藥物分析上就有著很廣泛的套用。在國內外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收係數載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。
3.2 與標準物及標準圖譜對照
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配製在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質，則兩者的光譜圖應完全一致。如果沒有標樣，也可以和現成的標 準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
3.3 比較最大吸收波長吸收係數的一致性
3.4 純度檢驗
3.5 推測化合物的分子結構
3.6 氫鍵強度的測定
實驗證明，不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不 同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑 。
3.7 絡合物組成及穩定常數的測定
3.8 反應動力學研究
3.9 在有機分析中的套用
有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑑別及組成結構測定的科學，它是在有機化學和分析化學的基礎上發展起來的綜合性學科。
常見故障和排除方法
| 象故障現 | 可能原因 | 排除方法 |
| 一.開啟電源開關，儀器無反應 | 1.電源未接通 2.電源保險絲斷 3.一起開關接觸不良 | 1.檢查供電電源和連線線 2.更換保險絲 3.更換一起電源開關 |
| 二.光源燈不工作 | 1.光源燈壞 2.光源供電器壞 | 1.更換新燈 2.檢查電路，看是否有電壓輸出，請求維修人員維修或更換電路板 |
| 三.顯示不穩定 | 1.儀器預熱時間不夠 2.電噪聲太大（暗盒受潮或電器故障） 3.環境震動過大，光源附近氣流過大或外界強光照射 4.電源電壓不良 5.儀器接地不良 | 1.延長預熱時間 2.檢查乾燥劑若受潮更換乾燥劑，若不能解決要查線路 3.改善工作環境 4.檢查電源電壓 5.改善接地狀態 |
| 四.透射比調不到0 | 1.光門漏光 2.放大器壞 3.暗盒受潮 | 1.修理光門 2.修理放大器 3.更換暗盒內乾燥劑 |
| 五.透射比調不到100% | 1.鹵鎢燈不亮 2.樣品室有擋光現象 3.光路不準 4.放大器壞 | 1.檢查燈電源 2.檢查樣品室 3.調整光路 4.修理放大器 |
| 六.測試結果不正常 | 1.樣品處理錯誤 2.吸收池不配對 3.波長不準 4.能量不足 | 1.重新處理樣品 2.對吸收池進行配對校正，求出校正值，進行矯正 3.用鐠釹濾光片調校波長 4.檢查光路或更換燈源 |
| 七.建立濃度方程時數值輸不進 | 1.電路故障 2.接外掛程式接觸不良 | 1.送生產廠修理 2.檢查接外掛程式 |
| 八.印表機出錯 | 操作錯誤 | 1.迅速關機，稍停後重新開機 2.送生產廠修理 |
| 九.印表機卡紙 | 1.裝紙不當 2.印表機所壞 | 1.迅速關機，稍後重新開機 2.檢查或更換印表機 |
