4種動物藥水提液中3種嘌呤鹼HPLC法測定
對烏蛇、蟾蜍、土蟲和地龍乾燥粉末進行超聲提取、離心分離、濾膜過濾後直接注入高效液相色譜儀中測定,紫外檢測黃嘌呤、次黃嘌呤、腺嘌呤含量。
實驗方法
一、主要儀器和試劑
等度液相色譜儀，配紫外檢測器
超音波清洗機離心機：10000r/min
無油真空泵溶劑過濾器
柱溫箱甲醇：色譜純
標準品:次黃嘌呤(hypoxanthine)、黃嘌呤(xanthine)、腺嘌呤(adenine)
實驗室用水為超純水
二、色譜條件
色譜柱：C18色譜柱，250mm×4.6mm,5μm
流動相：甲醇：水=5:95（V:V）
流速：1.0mL/min
柱溫：30℃
檢測波長：254nm
進樣量：20μL
三、標準試樣配置
將標準品配製成濃度為015g/L標準儲備液，逐級稀釋,配製成濃度為510×10-9、110×10-8、210×10-8、510×10-8、110×10-7、210×10-7、510×10-7、810×10-7g/mL的標準系列,經0.45μm濾膜過濾後,直接注入色譜儀測
其峰高,以質量濃度c(g/mL)對峰高y進行線性回歸,得次黃嘌呤、黃嘌呤、腺嘌呤線性方程分別為:y=819358x-112197(r=019997);y=312426x+015625(r=019999);y=319516x-015169(r=019996)。
四、試樣配置
分別將烏蛇、蟾蜍、土蟲、地龍樣品粉碎、混勻、過孔徑為180μm篩,準確稱取樣品置於試劑瓶中,加入純淨水8mL,蓋緊瓶塞,超聲提取一定時間,將提取液轉入離心管中,以10000r/min離心10min,清液轉入10mL容量瓶中定容、搖勻。經0.45μm濾膜過濾後直接注入色譜儀測定。以保留時間定性,外標峰高法定量。
色譜圖