腺病毒包裝

腺病毒包裝
腺病毒包裝中的難點主要在於怎么將外源基因表達框或者外源的shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上。由於腺病毒骨架載體比較大（>30kb），而且載體中的一些常用酶切位點幾乎都有多個，如果用常規的酶切-連線的方式將外源基因或者shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上，成功率很低，因此，目前的腺病毒表達系統基本上都是用同源重組的方法將外源基因或shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上。
本公司的腺病毒包裝出自Invitrogen公司的BLOCK-iT™AdenoviralExpressionSystem，與市面上其它腺病毒包裝往往利用大腸桿菌或者293細胞自身的同源重組系統不同，本公司的腺病毒表達系統採用的是Invitrogen公司的Gateway技術，即利用LR重組酶進行體外重組。與其它腺病毒表達系統相比，這種體外重組更加方便、快速，重組效率更高！此外，本公司對這套腺病毒表達系統多個部分進行了最佳化和改造，使得整套系統適用範圍更廣，鑑定更方便、準確，病毒構建及包裝更快捷。
圖3.1腺病毒骨架載體pAd/BL-DEST質粒圖譜
腺病毒骨架載體pAd/BL-DEST質粒圖譜
圖3.2穿梭載體pYr-adshuttle-1(表達基因用)質粒圖譜
穿梭載體pYr-adshuttle-1（表達基因用）質粒圖譜
圖3.3穿梭載體pYr-1.1(表達shRNA用)質粒圖譜
穿梭載體pYr-1.1-hU6-EGFP（表達shRNA用）質粒圖譜
贏潤生物腺病毒包裝系統--穿梭載體簡介
穿梭載體名稱穿梭載體特點
表達shRNA用
pYr-1.1hU6啟動子；EGFP螢光標記
pYr-1.2mU6啟動子；EGFP螢光標記
pYr-1.3hH1啟動子；EGFP螢光標記
pYr-1.4h7SK啟動子；EGFP螢光標記
pYr-2.1hU6啟動子；無螢光標記
pYr-2.2mU6啟動子；無螢光標記
pYr-2.3hH1啟動子；無螢光標記
pYr-2.4h7SK啟動子；無螢光標記
表達mirshRNA用
pYr-mir30-shRNACMV啟動子；micro30雙臂，EGFP螢光標記
表達基因用
pYr-adshuttle-1CMV啟動子；無螢光標記
pYr-adshuttle-2CMV啟動子；EGFP螢光標記，融合表達用
pYr-adshuttle-3CMV、hEF1α雙啟動子，可同時表達兩個基因
pYr-adshuttle-4CMV、hEF1α雙啟動子；hEF1α啟動子後插入EGFP螢光基因，CMV啟動子後空著
pYr-adshuttle-5CMV啟動子；RFP螢光標記，融合表達用
pYr-adshuttle-6CMV啟動子；外源基因-IRES-EGFP形式
pYr-adshuttle-7CMV、hEF1α雙啟動子；CMV啟動子後插入EGFP螢光基因，hEF1α啟動子後空著