範圍
本標準規定了保健食品中前花青素的測定方法。
本標準適用於以葡萄籽抄、葡萄皮、沙棘自、玫瑰果、藍漿果互、法國松樹皮提取物等為主要原料製造的保健食品中的前花青素的測定。
本標準的檢測限：方法的檢出限（LOD）為1.5×10 g/100g；方法的定量限（LOQ）為5.0×10 g/100g動。線性範圍為10µg/mL~150µg/mL。
原理
前花青素易溶於水，是黃烷-3-苯兒茶酚和表兒茶精連線而成，依據試樣中前花青素前體或聚合物在加熱的酸性條件和鐵鹽催化作用下，C-C鍵斷裂生成深紅色花青素離子即氰定的原理，使用高效液相色譜，利用C18反向柱分離，在波長525nm下檢測，根據保留時間定性，外標法定量，測定試樣中前花青素含量。
試劑和材料
1、甲醇（CHOH）：分析純
2、甲醇（CHOH）：色譜純
3、正丁醇(CH(CH)CHOH)：分析純
4、鹽酸（HCl）：分析純
5、二氯甲烷（CHCl）：分析純
6、異丙醇(CH)CHOH）：分析純
7、甲酸（HCOOH）：分析純
8、硫酸鐵銨(NHFe(SO)·12HO)：分析純
9、水（H2O）：為實驗室一級用水，電導率（25℃）為0.01mS/m
10、2%硫酸鐵銨(NHFe(SO)·12HO溶液：稱取硫酸鐵銨2g，用濃度為2mol/L鹽酸溶解，定容至100mL。
11、前花青素標準品濃度≥98%
12、前花青素標準溶液（1.00mg/mL）：稱取0.01g前花青素標準品（精確至0.0001g），用色譜純甲醇溶解並定容至10mL，棕色容量瓶中，此溶液現用現配。
儀器和設備
1、高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。
2、超音波清洗器。
3、離心機：4 000 r/min。
分析步驟
1、試樣處理
（1）片劑：取20片試樣，研磨成粉狀。
（2）膠囊：取20粒膠囊內容物，混勻。
（3）軟膠囊：擠出20粒膠囊內容物，攪拌均勻，如內容物含油，應將內容物儘可能擠完全。
（4）口服液：搖勻後取樣。
2、提取
（1）固體粉狀試樣：根據試樣含量稱取50 mg～500 mg(精確至0.001 g)試樣於50 mI。棕色容量瓶中，加入30 mI分析純甲醇，超聲處理20 min，放冷至室溫後，加分析純甲醇至刻度，搖勻，離心(3 000 r/min，10 min)或放置至澄清後取上清液備用。
（2）含油試樣：根據試樣含量稱取50 mg～500 mg(精確至0.001 g)試樣置於小燒杯中，用5 mI。二氯甲烷使試樣溶解，並倒入50 mI。容量瓶中，再用分析純甲醇多次洗燒杯，並倒入50 mL棕色容量瓶中，用分析純甲醇定容至刻度，搖勻。
（3）口服液：根據試樣含量準確吸取1 mI～5 mL樣液，置於50 mL容量瓶中，加分析純甲醇至刻度，搖勻。
3、水解反應
將正丁醇與鹽酸按95：5的體積比混合後，取出15 mL置於具塞錐瓶中，再加入0.5 mI硫酸鐵銨溶液和2 mI試樣溶液，混勻，置沸水浴回流，精確加熱40 min後，立即置冰水中冷卻，經0.45μm濾膜過濾，待進高效液相色譜分析。
4、標準曲線製備
吸取標準溶液0.10、0.25、0.50、1.0、1.5 mI．置於10 mL棕色容量瓶中，加分析純甲醇至刻度，搖勻。各取2 mL測定，處理方法同上，以峰高或峰面積對濃度作標準曲線。
5、液相色譜參考條件
（1）色譜柱：耐低pH型的ODS C18柱，4.5 mm×150 mm，5μm。
（2）柱溫：35℃。
（3）檢測器：紫外檢測器。
（4）檢測波長：525 nm。
（5）流動相：水+甲醇(色譜級)+異丙醇+甲酸=73+13+6+8。
（6）進樣量：10μL。
（7）流速：1.0 mL/min。
（8）色譜分析：取標準溶液及試樣溶液注入色譜儀中，以保留時間定性，以試樣峰高或峰面積與標準比較定量。
6、 注意事項
實驗過程中應避免陽光直射。
結果計算
試樣中前花青素的含量按式(1)進行計算：
X=X×V×f/m （1）
式中：
X——-試樣中前花青素的含量，單位為克每千克或克每升(g/kg或g/L)；
X——從標準曲線上得到的含量，單位為毫克每毫升(mg/mL)；
V——試樣定容體積，單位為毫升(mL)；
f——稀釋倍數；
m——試樣的質量(或體積)，單位為克或毫升(g或mL)。
計算結果保留三位有效數字。
精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10% 。
色譜圖
圖1 在上述色譜條件下的色譜圖見圖1～圖2。
圖2 