M13噬菌體

M13噬菌體

M13噬菌體是一種絲狀噬菌體,含單鏈DNA,感染含F因子的大腸桿菌細胞。感染宿主後不裂解細菌細胞,只利用細胞內物質完成自身增殖,組裝成完整病毒顆粒後被宿主細胞分泌而出,宿主細胞仍能繼續生長分裂。為分子生物學中理想的質粒載體。

概述

M13噬菌體M13噬菌體

M13噬菌體是一種絲狀噬菌體,內有一個環狀單鏈DNA分子,長6407個核苷酸,含DNA複製和噬菌體增殖所需的遺傳信息。M13DNA的複製起始位點定位在基因間隔區內。但是基因間隔區的有些核苷酸序列即使發生突變、缺失或插入外源DNA片段,也不會影響M13DNA的複製,這為M13DNA構建克隆載體提供了條件。

其中M13mp系列是對野生型M13加以改造而得到的,插入了多克隆位點和LacZ基因,可容納300-400bp外源DNA,可用於製備DNA測序時用的單鏈模板和核酸探針 。

M13噬菌體在分子生物學上通常作為質粒載體套用。

1、能在大腸桿菌(只感染雄性大腸桿菌)中自主複製,而且能連同所帶的外源DNA一起複製;

2、很容易同細菌DNA分開並加以純化;

3、有一段DNA對於它們自身在細菌中的增殖不是必需的。

因此,外源DNA可以插入這一段DNA中,或置換這一段DNA而不影響載體的複製。

生物學

組成和結構

M13噬菌體M13噬菌體

1、M13噬菌體顆粒是絲狀的,只感染雄性大腸桿菌。感染宿主後不裂解宿主細胞,而是從感染的細胞中分泌出噬菌體顆粒,宿主細胞仍能繼續生長和分裂。

2、M13噬菌體的基因組為單鏈DNA,由6407的鹼基組成(GenBank註冊號為V00604)。基因組90%以上的序列可編碼蛋白質,共有11個編碼基因,基因之間的間隔區多為幾個鹼基。

3、M13噬菌體基因組DNA為正鏈,按基因Ⅱ至基因Ⅳ方向合成,與噬菌體的mRNA序列同義。

4、M13噬菌體顆粒為絲狀長管狀結構,長880nm,直徑6~7nm 。

特點

1、能在大腸桿菌中自主複製,而且能連同所帶的外源DNA一起複製;
2、很容易同細菌DNA分開並加以純化;
3、有一段DNA對於它們自身在細菌中的增殖不是必需的。

4、溶源性,不裂解宿主菌,極大簡化噬菌體純化步驟。

因此,外源DNA可以插入這一段DNA中,或置換這一段DNA而不影響載體的複製。所以M13噬菌體是分子生物學中重要的工具載體。

增殖過程

吸附是噬菌體感染的第一步,M13噬菌體只感染具有性纖毛的菌株,攜帶F質粒的菌株可產生性纖毛。在吸附過程中,噬菌體的基因Ⅲ蛋白與性纖毛髮生作用。隨後絲狀噬菌體穿入到性纖毛,基因Ⅲ蛋白與宿主的TolQ、TolR和TolA蛋白發生作用,去除外殼蛋白,致使病毒DNA及附著於其上的基因Ⅲ蛋白進入宿主菌體內。 感染宿主後不裂解細菌細胞,只利用細胞內物質完成自身增殖,組裝成完整病毒顆粒後被宿主細胞分泌而出,宿主細胞仍能繼續生長分裂。

載體功能

單鏈DNA的酶切和連線是比較困難的,因此,M13噬菌體在用作載體時是利用其雙鏈狀態的RFDNA(複製DNA,replicative form DNA )。RFDNA很容易從感染細胞中純化出來,可以像質粒一樣進行操作,並可通過轉化方法再次導入細胞

載體的宿主菌

M13噬菌體M13噬菌體
由於M13噬菌體通過F質粒編碼的性纖毛進入宿主細胞內,故只能用雄性細菌來增殖病毒。研究者已經構建了許多攜帶F'質粒並便於M13載體進行基因操作的多種大腸桿菌菌株,其中最重要的遺傳標誌有:
(1)lacZDMl5LacZ基因缺失突變體
(2)D(lac-proAB)lac基因缺失突變體。
(3)lacIqlacI基因的突變體。
(4)proAB細菌染色體上脯氨酸生物合成酶類的編碼區域。
(5)traD36抑制F'因子接合轉移的突變。
(6)hsdRl7與hsdR4對大腸桿菌K株Ⅰ類限制-修飾系統失去限制活性但仍保留修飾功能的突變體。
(7)recA1大腸桿菌重組酶基因。
(8)supE琥珀抑制基因
在13噬菌體載體中進行克隆時常用的宿主菌株如下:
JM101supED(lac-proAB)[F'traD36proAB+lacIqlacZDM15]
JM105JM101/hsdR4
JM107JM101/hsdR17
JM109JM101/hsdR17recA1
TG1JM101/hsdD5(不修飾不限制)
XL1-BluesupElac-hsdR17recA1[F'proAB+lacIqlacZDM15]Tn10(Tetr)

未來發展

納米材料

科學家研究發現M13噬菌體在納米材料方面的套用潛力,繪製出立體液晶的想像圖:M13噬菌體(金色)可與無機的納米晶體(紫色)連線,並且群聚排列成規則的陣列。這種薄膜,可用來製作可撓式螢幕 。

生物發電

生物納米模式圖生物納米模式圖
美國加利福尼亞州大學伯克利分校研究小組發現如何從M13噬菌體中產生電能,M13噬菌體具有壓電性,意味著它能夠將機械能轉變為電能。研究人員認為這項發現未來有一天將為人類行走時對手機充電提供一種新的方式,同時能夠替換當前手機中的有毒壓電元件。

科學家稱,M13噬菌體是一種潛在的完美能源,因為這種病毒僅吞食細菌,對人體無害,綠色環保。此外,這種能源也很廉價,並且容易獲得,從一個盛放被感染細菌的燒瓶中就可以培養出上萬億個病毒。

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