己烯雌酚軟膏是以硬酯酸、羊毛脂、丙二醇、甘油等為基質的乳劑型基質軟膏。臨床上用於治療老年性陰道炎、外陰炎。己烯雌酚為性激素類藥，控制其含量非常重要。
1 儀器與試藥
LC-10AD高效液相色譜儀系列。
己烯雌酚對照品由中國藥品生物製品檢定所提供；己烯雌酚軟膏及空白基質均由江西省婦幼保健院提供。甲醇為色譜純，水為重蒸水。
2 色譜條件
PinnacleODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-水(70∶30)，流速0.8mL.min-1；檢測波長241nm，靈敏度0.01AUFS，進樣量20μL。
3 線性關係
精密稱取己烯雌酚對照品20.3mg於25mL量瓶中，加乙醇溶解並稀釋至刻度。精密量取2mL於25mL量瓶中。加乙醇稀釋至刻度。分別取1，2，3，4，5，6mL於10mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度。取20μL進樣，記錄色譜圖，以峰面積A對濃度C回歸，回歸方程為
A=9938C-114.8 r=0.9995說明濃度在6.5～39μg.mL-1範圍內線性關係良好。
4 精密度試驗
取26μg.mL-1己烯雌酚對照品溶液20μL，重複進樣5次，記錄峰面積，結果RSD=0.4%。
5 樣品測定
精密稱取己烯雌酚軟膏2.5g於100mL量瓶中，加乙醇適量，超聲提取1h後，冷至室溫，加乙醇至刻度。取續濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液及對照品溶液(26μg.mL-1)各20μL分別進樣。記錄色譜圖(圖1)。按外標法計算樣品的含量。結果3批樣品含量分別為93.2%，90.8%，91.7%(n=3)。
1.己烯雌酚
6 重複性試驗
取同批樣品5份，按樣品測定項下方法測定，並計算含量，結果RSD=2.0%。
7 回收率試驗
取已知含量同一樣品5份，各約1.25g，精密稱定。加入己烯雌酚對照品1.26mg，按樣品測定項下方法測定，結果平均回收率102.4%，RSD=1.4%(n=5)。
8 討論
曾採用鹼水提，酸化後氯仿提，蒸乾氯仿乙醇定容後測定［1］，結果降解產物含量高，且操作較繁瑣。經比較，用乙醇提取較好。
提取時間考察了超聲提取30，60，90min，結果60min以後提取量不再增加。
流動相甲醇-水的比例經實驗對比，以70∶30為最理想。在本系統內，己烯雌酚保留時間8.3min，理論塔板數達1000，各峰分離度均大於1.5。基質不影響含量測定。
